在3D细胞培养物中监测生物学的测定和工具
研究人员正在转向3D培养方法，以创建用于研究蜂窝生物学的模型系统。3D细胞培养通过促进与矩阵的更自然相互作用来模拟组织或肿瘤环境比2D环境更贴近，甚至允许细胞分泌自己的矩阵。3D细胞培养还提供更多的自然电池到细胞接触，并产生对O的进入梯度2和营养素。
通常，3D细胞培养物可以揭示与单层培养相比细胞反应的显着差异。通过观察细胞健康，新陈代谢和表达的变化，可以监测3D培养中细胞的生物学。最终，这些表型变化与细胞的基因型或导致疾病状态的基因型中的改变相关。我们提供测定和工具，以解决工作流程中的每一步，从细胞健康和基因表达和分析中的代谢变化。
细胞健康的变化
大多数细胞健康检测的目的是监测单层培养的细胞。在3D培养的细胞中使用这些方法，无论是球形培养还是水凝胶基质，都带来了挑战。如果你需要从细胞质中分离蛋白质或代谢物，标准方案不太可能适用于3D培养。方案和试剂必须针对3D培养进行优化。CellTiter- Glo®3D分析是优化了更多的洗涤剂和专门的协议。我们已经开发了用于3D培养的优化方案，用于我们其他几种通常用于单层培养的检测。
细胞活力
Realtime-Glo™MT细胞活力测定
Non-Lytic化验
通过连续72小时的生物荧光试验监测细胞活力。极其敏感的检测检测细胞还原当量。从同一孔中分离核酸用于基因表达或基因组分析。Multiplex与CellTox™Green也测量死亡细胞。
Realtime-Glo™MT细胞活力测定对增加HCT116球体直径的响应
详情请参阅申请须知(连结如下)。
细胞毒性
LDH-Glo™细胞毒性测定
Non-Lytic化验
通过这种敏感的生物发光测定法测量细胞毒性通过乳酸脱氢酶释放。该测定仅需要2-5μl培养介质，每个时间点允许多个相同的采样。用于在其他细胞测定之前测量细胞毒性，如Celltiter-glo 3D或Caspase-glo 3/7测定。
复用LDH-GLO™测定和Celltiter-Glo®MaSay
用黄曲霉毒素B1处理人肝脏微仪式球体48小时。收集介质样品并用LDH-Glo™测定测定。将剩余的细胞与Celltiter-Glo 3D测定法测定活力。可用的详细信息技术手册TM548。
细胞毒性
Celltox™绿色细胞毒性测定
Non-Lytic化验
通过荧光测定连续监测细胞毒性72小时。细胞不可渗透的DNA结合染料进入具有受损膜的细胞并染色细胞DNA。与RealTime-Glo™MT复用，用于连续监测Live和Dead细胞或在Celltiter-Glo 3D终点分析的上游使用。
相同的多路复用来监测活和死细胞
详情见科学海报(链接如下)。
凋亡
Caspase-Glo®3/ 7 3D测定
Lytic Assay.
使用敏感的生物发光测定来监测细胞凋亡，测量Caspase-3和-7活性。多重与细胞毒性和细胞活力测定以更完整的凋亡反应表征。
复用Celltox™绿色细胞毒性测定，Celltiter-Fluor TM细胞活力测定和Caspase-Glo 3/7 3D测定
接触硼替佐米24小时后A549球体上的同孔多路复用。使用GloMax®发现仪器测量荧光和发光。
凋亡
RealTime-Glo™Annexin V凋亡和坏死检测
Non-Lytic化验
通过多路复用的生物发光膜蛋白V测定测量细胞凋亡和二次坏死，荧光坏死测定连续持续48小时。将核酸与基因表达或基因组分析相同孔。
HepG2球状体膜联蛋白V暴露和继发性坏死的测定
使用RealTime-Glo™Annexin V凋亡和坏死测定测量HepG2球体的膜蛋白v暴露和髋部阳性的二次坏死与48小时暴露于紫杉醇。用Glomax®发现仪器测量的发光和荧光。
ADME
P450-GLO™CYP3A4测定和筛选系统
非LYTIC ASSAY选项
监测细胞色素P450酶的激活（CYP1A2那CYP2B6和CYP2C9也可用)通过生物发光试验。非溶解协议选项使用相同的协议单层和3D培养，基质扩散到细胞中，通过CYP活性转化为荧光素。荧光素扩散出细胞，并在培养基上进行实验。细胞可以用于其他基于细胞的检测或核酸提取。
人肝微组织CYP3A4活性和活性监测
监测人肝脏微仪的细胞色素P450 3A4响应利福平的活性和活力。使用Nuliferin-IPA使用非裂谷P450-Glo™3A4测定测量CYP3A4活性，然后用Celltiter-Glo 3D测定测定可存活率的相同孔测量。用Glomax®发现仪器测量。
代谢变化
能量代谢对于细胞健康和功能和代谢物与细胞能量，蜂窝构建块和信号通路的创建相关。我们提供多种测定以测量具有用于3D细胞培养应用的优化方案的代谢活动，包括乳酸，谷氨酰胺，氧化应激和二核苷酸检测测定。bob娱乐平台下载常见的样品制备允许使用相同样品与血糖-Glo™，乳酸-Glo™，乳糖-Glo™，谷氨酰胺/谷氨酰胺-Glo™测定的共测。
核苷酸和协调检测
NAD / NADH-GLO™和NADP / NADPH-GLO™测定
Lytic Assay.
用该裂解生物发光测定监测NAD + / NADH或NADP / NADPH / NADPH比率。裂解物分为且通过酸/碱反应测量氧化或减少NAD +或NADH的形式。对标准单层协议的略微修改（下面的海报链接中的详细信息）。
培养的HCT116球状体中NAD +和NADH水平的测量
培养的增大直径的HCT116球体中NAD+和NADH水平的测定。使用CellTiter-Glo®3D测量活细胞的平行孔(信号与直径相关)。详情见科学海报(链接如下)。
代谢物检测
乳酸 - Glo™测定
非LYTIC ASSAY选项
使用非裂变，敏感的生物发光测定选项监测3D培养物的乳酸乳酸变化。每个时间点只需要2-5μl培养基，允许从同一孔中获得多个样品。细胞可用于其他基于细胞的测定或核酸分离。
表达的变化
与单层培养相比，3D培养的细胞在基因表达方面存在差异。细胞与细胞之间的接触和细胞与基质之间的接触的变化将是非常不同的，培养物中的氧和营养成分的梯度也将影响基因的表达。为了分析基因表达的差异，必须对RNA进行分离和定量。然后，通过RT-qPCR分析特定的基因，或者通过RNA-seq等技术监测细胞变化。
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基因组分析
理解基因型-表现型或表型-基因型差异是重要的，特别是在研究原发细胞或肿瘤时。你可以分析基因型并使用3D细胞培养来理解表现型或者你可以选择研究表现型然后观察基因型来理解这些变化发生的原因。对于基因组DNA分析，您将需要提取和量化DNA。然后你将通过qPCR观察特定的基因，或者选择用NGS检测基因组。如果您正在处理原代细胞，您必须能够区分哪些样本来自该任务经常选择的供体- str配置文件。STR配置文件对于确认您正在处理的细胞确实是您想要的细胞也很重要。
