用于监测3D细胞培养中生物学的分析和工具
研究人员正在转向3D培养方法来创建研究细胞生物学的模型系统。3D细胞培养通过促进与基质的更自然的相互作用，甚至允许细胞分泌自己的基质，从而比2D环境更接近组织或肿瘤环境。3D细胞培养也提供了更自然的细胞间接触，并产生了一个进入O2和养分。
通常，与单层细胞培养相比，3D细胞培养可以揭示细胞反应的显著差异。通过观察细胞健康、代谢和表达的变化，可以实现在3D培养中监测细胞生物学。最终，这些表型变化与细胞的基因型或导致疾病状态的基因型改变有关。我们提供分析和工具来解决您工作流程中的每一步，从细胞健康和代谢变化到基因表达和分析。
细胞健康的变化
大多数细胞健康检测是为监测单层培养的细胞而设计的。在3D培养的细胞中使用这些检测，无论是球形培养还是在水凝胶基质上，都带来了挑战。如果你需要从细胞质中分离蛋白质或代谢物，标准方案不太可能适用于3D培养。必须对3D培养方案和试剂进行优化。CellTiter- Glo®3D分析优化了更多的洗涤剂和专门的协议。我们已经开发了用于3D培养的方案，用于我们通常用于单层培养的其他几种分析。
细胞活力
real - time - glo™MT细胞活力测定
Non-Lytic化验
通过持续72小时的生物发光检测监测细胞活力。极其敏感的检测方法监测细胞还原当量。从同一孔中分离核酸用于基因表达或基因组分析。CellTox™Green复合也可测量死亡细胞。
real - time - glo™MT细胞活力测定对增大HCT116球体直径的响应
详情请参阅应用说明(链接如下)。
细胞毒性
LDH-Glo™细胞毒性试验
Non-Lytic化验
用这种灵敏的生物发光法通过乳酸脱氢酶释放测定细胞毒性。该分析在每个时间点仅需要2-5μl培养基，允许从同一孔中进行多次取样。用于在进行其他细胞试验（如细胞滴度-Glo®3D或半胱天冬酶Glo®3/7试验）之前测量细胞毒性。
多路复用LDH-Glo™ 分析和细胞滴度Glo®分析
用黄曲霉毒素B1处理人肝微组织球体48小时。收集培养基样品并用LDH-Glo进行分析™ 化验使用CellTiter Glo®3D分析法对剩余细胞进行活性分析。详情请参阅技术手册TM548．
细胞毒性
CellTox™绿色细胞毒性检测试剂盒
Non-Lytic化验
通过荧光检测连续72小时监测细胞毒性。细胞不渗透的DNA结合染料进入细胞膜受损的细胞并染色细胞DNA。Multiplex与RealTime- Glo™MT用于活细胞和死细胞的连续监测或使用CellTiter-Glo®3D端点分析的上游。
用同井多路复用技术监测活细胞和死细胞
详情见科学海报(链接如下)。
凋亡
Caspase-Glo®3/7 3D分析
溶解性试验
使用测量caspase-3和caspase-7活性的灵敏生物发光分析监测细胞凋亡。多重细胞毒性和细胞活力分析，以更完整地描述凋亡反应。
CellTox™Green细胞毒性分析、CellTiter-Fluor™细胞活力分析和Caspase-Glo®3/7 3D分析
硼替佐米24小时后A549球体上的同孔复用。使用GloMax®Discover仪器测量荧光和发光。
凋亡
RealTime-Glo™Annexin V细胞凋亡和坏死检测
Non-Lytic化验
通过复合生物发光膜联蛋白V分析和荧光坏死分析连续监测凋亡和继发性坏死长达48小时。从同一孔中分离核酸，用于基因表达或基因组分析。
Annexin V暴露和HepG2球状细胞继发性坏死的测量
使用实时Glo测量HepG2球体暴露于紫杉醇48小时后的膜联蛋白V暴露和继发性坏死™ 膜联蛋白V凋亡和坏死测定。使用GloMax®Discover仪器测量发光和荧光。
ADME
P450‐Glo™CYP3A4检测和筛选系统
Non-Lytic分析选项
监测细胞色素P450酶的激活(CYP1A2,CYP2B6和CYP2C9也可)通过生物发光分析。非溶解协议选项使用单层和3D培养相同的协议，其中前基质扩散到细胞，通过CYP活性转化为荧光素。荧光素扩散出细胞，在培养基上进行检测。细胞可用于其他细胞测定或核酸提取。
监测人肝组织CYP3A4活性和活力
监测人肝组织细胞色素P450 3A4活性和活力对利福平的响应。使用荧光素- ipa非溶解P450-Glo™3A4测定CYP3A4活性，然后使用CellTiter- Glo®3D测定同孔测定活性。使用GloMax®Discover仪器测量。
代谢变化
能量代谢对细胞健康和功能至关重要，代谢物与细胞能量、细胞构建块的产生和信号通路有关。我们为3D细胞培养应用提供了几种测定代谢活性的优化方案，包括乳酸、谷氨酰胺、氧化应激和二核苷酸检测测定。普通样品制备允许与葡萄糖Glo进行共测量™, 乳酸Glo™, 谷氨酸Glo™ 谷氨酰胺/谷氨酸Glo™ 同一样品的分析。bob娱乐平台下载
核苷酸和辅因子检测
NAD/NADH Glo™ 和NADP/NADPH Glo™ 化验
溶解性试验
用这种裂解性生物发光法监测NAD+/NADH或NADP/NADPH比值。裂解液被分解，并通过酸碱反应测量氧化或还原形式的NAD+或NADH。对标准的单分子层协议进行了轻微的修改(详情见下面的海报链接)。
培养HCT116球体中NAD+和NADH水平的测定
增大直径HCT116培养球体中NAD+和NADH水平测定。用CellTiter-Glo®3D测量活细胞平行孔(信号与直径相关)。详情见科学海报(链接如下)。
代谢物检测
Lactate-Glo™试验
Non-Lytic分析选项
使用非溶解、敏感的生物发光检测选项监测3D培养中的乳酸变化。每时间点只需要2-5μl培养基，允许从同一孔中提取多个样品。细胞可用于其他细胞化验或核酸分离。
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基因组分析
了解基因型-表现型或表现型-基因型差异是很重要的，特别是在研究原代细胞或肿瘤时。你可以分析一个基因型并使用3D细胞培养来了解表现型，或者你可以选择研究表现型，然后查看基因型来了解这些变化发生的原因。对于基因组DNA分析，您将需要提取并量化DNA。然后你会通过qPCR来观察特定的基因，或者选择用NGS来检查基因组。如果您使用原代细胞，您必须能够区分哪一个样本来自哪一个供体。STR配置文件对于确认您正在处理的细胞确实是您想要的细胞也很重要。
