三维细胞培养中生物学监测的分析和工具
研究人员正转向3D培养方法来创建研究细胞生物学的模型系统。三维细胞培养通过促进与基质的更自然的相互作用，甚至允许细胞分泌自己的基质，从而比二维环境更接近于组织或肿瘤环境。三维细胞培养也提供了更自然的细胞间接触，并产生一个梯度的访问O2还有营养。
通常情况下，三维细胞培养可以显示出与单层细胞培养相比，细胞反应的巨大差异。通过观察细胞健康、新陈代谢和表达的变化，可以监测三维培养中细胞的生物学特性。最终，这些表型变化与细胞的基因型或导致疾病状态的基因型改变有关。我们提供分析和工具来解决您工作流程中的每一个步骤，从细胞健康和代谢变化到基因表达和分析。
细胞健康变化
大多数细胞健康检测都是为监测单层培养的细胞而设计的。在三维培养的细胞中，无论是球形培养还是水凝胶基质上，使用这些分析方法都是一个挑战。如果你需要从细胞质中分离蛋白质或代谢物，标准的方法不太可能适用于3D培养。必须针对3D培养优化方案和试剂。CellTiter-Glo®3D分析采用更多洗涤剂和专门方案进行优化。我们已经开发了用于3D培养的优化方案，用于我们在单层培养中通常使用的其他几种分析。
细胞活力
实时Glo™ MT细胞活性测定
非溶出试验
通过生物发光分析连续监测细胞活力达72小时。非常敏感的分析监测细胞还原当量。从同一孔中分离核酸用于基因表达或基因组分析。细胞毒素复合物™ 绿色也可以测量死细胞。
实时Glo响应™ MT细胞活性测定对HCT116球体直径的影响
详细信息请参见申请说明（链接如下）。
细胞毒性
乳酸脱氢酶Glo™ 細胞毒性分析
非溶出试验
通过乳酸脱氢酶释放测定细胞毒性。该测定法每个时间点只需要2-5μl培养基，允许从同一孔中进行多次取样。用于在其他细胞分析（如CellTiter-Glo®3D或Caspase-Glo®3/7分析）之前测量细胞毒性。
复用LDH-Glo™ 分析和细胞滴度Glo®分析
用黄曲霉毒素B1处理人肝微组织球48小时。收集培养基样品，用LDH-Glo进行测定™ 化验。用CellTiter Glo®3D分析法检测剩余细胞的活力。详细信息请参见技术手册TM548.
细胞毒性
细胞毒素™ 绿色细胞毒性试验
非溶出试验
通过连续72小时的荧光试验监测细胞毒性。细胞不可渗透的DNA结合染料进入细胞膜受损，染色细胞DNA。实时多路复用-Glo™ MT用于连续监测活细胞和死细胞或使用CellTiter Glo®3D终点分析的上游。
同样的井多路复用监测活细胞和死细胞
科学海报中的细节（链接如下）。
细胞凋亡
Caspase-Glo®3/7 3D分析
裂解试验
通过检测caspase-3和caspase-7活性的灵敏生物发光法监测细胞凋亡。与细胞毒性和细胞活力分析的复合，以更完整地描述凋亡反应。
复用细胞毒素™ 绿色细胞毒性试验™ 细胞活力测定和Caspase-Glo®3/7 3D测定
暴露于硼替佐米24小时后，在A549球体上形成相同的孔。使用GloMax®Discover仪器测量荧光和发光。
细胞凋亡
实时Glo™ 膜联蛋白V凋亡和坏死测定
非溶出试验
通过复合生物发光膜联蛋白V分析和荧光坏死分析持续监测细胞凋亡和继发性坏死长达48小时。从同一孔中分离核酸用于基因表达或基因组分析。
HepG2球体膜联蛋白V暴露和继发性坏死的测定
实时Glo检测紫杉醇暴露48小时后HepG2球体的膜联蛋白V暴露和继发性坏死™ 膜联蛋白V凋亡和坏死测定。用GloMax®Discover仪器测量发光和荧光。
ADME公司
P450-Glo公司™ CYP3A4分析筛选系统
非溶解分析选项
监测细胞色素P450酶的激活(CYP1A2型,CYP2B6型和CYP2C9型也可用）通过生物发光分析。非裂解方案选择使用相同的方案进行单层和三维培养，其中扩散到细胞中的前基质通过CYP活性转化为荧光素。荧光素扩散出细胞，并在培养基上进行分析。细胞可用于其他基于细胞的分析或核酸提取。
人肝微组织CYP3A4活性和活力的监测
监测利福平对人肝微组织细胞色素P450 3A4活性和活力的影响。CYP3A4活性用非裂解P450-Glo测定™ 3A4用荧光素IPA进行分析，然后用CellTiter-Glo®3D分析进行同样的活力测定。使用GloMax®Discover仪器测量。
核苷酸和辅因子检测
NAD/NADH格洛™ 和NADP/NADPH-Glo™ 化验
裂解试验
用这种裂解生物发光法监测NAD+/NADH或NADP/NADPH比值。裂解产物被分离，并通过酸/碱反应测量NAD+或NADH的氧化或还原形式。对标准单层协议的轻微修改（详情见下面的海报链接）。
体外培养HCT116球体NAD+和NADH水平的测定
体外培养的HCT116球体中NAD+和NADH水平的测定。用CellTiter Glo®3D测量活细胞的平行孔（信号与直径相关）。科学海报中的细节（链接如下）。
代谢物检测
乳酸Glo™ 化验
非溶解分析选项
使用非溶性、灵敏的生物发光分析选项监测3D培养物中乳酸的变化。测定每个时间点只需要2-5μl培养基，允许从同一孔中提取多个样品。细胞可用于其他基于细胞的分析或核酸分离。
基因组分析
了解基因型-表型或表型-基因型差异非常重要，尤其是在研究原代细胞或肿瘤时。你可以分析一个基因型并使用3D细胞培养来了解表型，或者你可以选择研究表型，然后观察基因型来了解为什么会发生这些变化。对于基因组DNA分析，你需要提取和量化DNA。然后你将通过qPCR观察特定的基因，或者选择用NGS检测基因组。如果你使用的是原代细胞，你必须能够区分哪一个样本来自哪一个供体STR基因图谱经常被选择用于该任务。STR配置文件对于确认你正在使用的细胞是你真正想要的细胞也很重要。
