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实验和工具来监控在3D细胞培养生物

研究人员正转向3D培养方法来创建模型系统来研究细胞生物学。3D细胞培养比2D环境更接近组织或肿瘤环境,促进细胞与基质的自然相互作用,甚至允许细胞分泌自己的基质。3D细胞培养也提供了更多的细胞间的自然接触,并产生一个梯度的O2和营养物质。

通常情况下,3D细胞培养可以揭示相比单层培养的细胞反应的巨大差异。监测在3D培养细胞的生物学可以通过观察细胞的健康,代谢和表达的变化接近。最终,这些表型改变相关返回细胞的基因型或导致疾病状态的基因型改变。我们提供分析和工具,以解决在工作流程中的每一步,从细胞健康和基因表达分析和代谢变化。

新来的3D细胞培养?

了解什么是3D细胞培养物,为何以及如何被使用,以及如何选择与3D模型的测定法。

3D细胞培养指南
怎么办3D试验工作在实验室?

了解一个实验室如何使用细胞的健康检测在3D模型卵巢癌研究。

阅读案例研究

细胞健康的变化

大多数细胞的健康检测被设计用于监测单层培养的细胞。使用这些测定法在三维培养的细胞,无论是球状体培养物或水凝胶基质,提供挑战。标准协议是不可能与3D培养工作,如果你需要隔离的蛋白质或细胞质的代谢物。的协议和试剂(S)必须为3D培养进行优化。的CellTiter-Glo®底三维测定用多种洗涤剂和一个专门的协议优化。我们已经开发了用于三维培养使用好我们通常在单层培养使用的其它试验的优化方案。

特色产品

的CellTiter-Glo®底三维细胞活力检测

裂解分析

监测通过的ATP测量细胞存活力与专门用于3D培养设计的试剂。利用经典的CellTiter-Glo®检测的具有更大的溶解能力,这允许更深的渗透产生用于定量更大ATP释放相同的ATP测量荧光素酶的化学反应。共测量死细胞与CellTox™绿色细胞毒性测定或媒体与LDH-GLO™细胞毒性测定采样相同阱复用。

的CellTiter-3DGlo®底中的裂解能力相比ATPlite 1步骤试剂
的CellTiter-3DGlo®底中的裂解能力相比ATPlite 1步骤试剂

细胞活力

实时-GLO™MT细胞活性检测

非裂解分析

通过生物发光测定中连续长达72小时监测细胞生存力。极其敏感的分析监测细胞还原当量。分离核酸从同一孔的基因表达或基因组分析。复用CellTox™绿能也测量死细胞。

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实时-GLO™MT细胞活性检测的响应增加HCT116球体直径
RealTime-Glo&trade响应;提高HC116球状体直径的MT细胞活力试验

在应用笔记详细信息(下面的链接)。

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细胞毒性

LDH-GLO™细胞毒性检测

非裂解分析

测量细胞毒性通过乳酸脱氢酶释放与这种敏感的生物发光试验。该方法在每个时间点只需要2-5倍的培养基,允许从同一口井进行多次取样。用于在其他细胞检测如CellTiter- Glo®3D或Caspase-Glo®3/7检测之前测量细胞毒性。

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复用的LDH-GLO™检测和的CellTiter-Glo®检测
复用的LDH-GLO™检测和的CellTiter-Glo®检测

人肝微组织的球状体用黄曲霉毒素B1处理48小时。媒体样品收集,并与LDH-GLO™检测分析。剩余的细胞进行测定,用于与的CellTiter-Glo®底三维测定存活力。详细信息可在技术手册TM548

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细胞毒性

CellTox™绿色细胞毒性检测

非裂解分析

监测通过荧光测定法的细胞毒性连续72小时。细胞不可渗透的DNA结合染料进入具有受损膜和污点细胞DNA的细胞。多路复用与RealTime-格洛™MT用于连续监测活的和死的细胞或的CellTiter-Glo®底三维终点分析的上游使用的。

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同井复监控实时和死细胞
同井复监控实时和死细胞

详细信息科学海报(下面的链接)。

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细胞凋亡

胱天蛋白酶Glo®底3/7 3D分析

裂解分析

监视器凋亡使用灵敏的生物发光测定,其测量caspase-3和-7活动。复用细胞毒性和细胞活力测定的凋亡反应更完整的表征。

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多路复用所述CellTox™绿色细胞毒性测定,的CellTiter-氟™细胞活力检测和Caspase-Glo®底3/7三维测定
复用CellTox™绿色细胞毒性实验和胱天蛋白酶Glo®底3/7测定

24小时的暴露后,硼替佐米同一井复对A549的球体。荧光和发光用的GloMax®发现仪器测量。

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细胞凋亡

实时-GLO™膜联蛋白V细胞凋亡和坏死分析

非裂解分析

通过多路生物发光膜联蛋白V检测和荧光坏死检测连续监测细胞凋亡和继发性坏死达48小时。分离核酸从同一孔的基因表达或基因组分析。

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测量Annexin V暴露和HepG2球状体的继发性坏死
测量Annexin V暴露和HepG2球状体的继发性坏死

膜联蛋白V曝光和HepG2球状体继发性坏死至48小时暴露于使用实时-GLO™膜联蛋白V凋亡和坏死测定紫杉醇的测量。发光和荧光与GloMax®查询仪器测定的。

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ADME

P450-GLO™CYP3A4检测和筛选系统

非裂解分析选项

细胞色素P450酶的激活监视器(CYP1A2CYP2B6CYP2C9也可)通过生物发光检测。非裂解协议选项使用单层和3D培养其中prosubstrates扩散到细胞中获得通过CYP活性转化为荧光素相同的协议。萤光素扩散出细胞,并测定在培养基中进行。细胞可以可用于其它的基于细胞的测定或核酸提取。

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监测人肝脏微组织CYP3A4活动与活力
监测人肝脏微组织细胞色素P450 3A4活动与活力

响应监测人体肝脏微组织细胞色素P450 3A4活性和生存能力利福平。CYP3A4活性使用非裂解P450-GLO™3A4测定用荧光素IPA随后相同阱与CellTiter-Glo®底三维测定生存力的测量来测量。测量与Gl​​oMax®发现仪器。

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自噬

自噬LC3 HiBiT报告基因检测系统

非裂解分析

监测自噬LC3-II通量与生物发光平板为基础的分析。用LC3 HiBiT报告基因稳定转染细胞,在3D培养中生长,用溶解HiBiT检测系统监测。报告基因也可以通过荧光显微镜监测LC3-II蛋白。

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LC3 HiBiT报告基因表达HEK293球状体对自噬刺激因子和抑制因子的反应
LC3 HiBiT报告基因表达HEK293球状体对自噬刺激因子和抑制因子的反应

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代谢变化

能量代谢是细胞健康和功能的关键和代谢物都与细胞能量,细胞积木创作和信号通路。我们提供了多种试验来测量与优化的协议,用于3D细胞培养应用,包括乳酸,谷氨酰胺,氧化应激和二核苷酸检测测定代谢活性。bob娱乐平台下载共同的样品制备允许共测量与葡萄糖-GLO™,乳酸盐-GLO™,谷氨酸-GLO™和谷氨酰胺/谷氨酸-GLO™测定从同一样品。

特色产品

Glucose-Glo™试验

非裂解分析选项

葡萄糖敏感的生物发光措施。要求每个时间点只有2-5μl条件细胞培养基使每口井的多个样本时间过程的研究。测试在microspheroid文化条件培养基。

iCell®肝细胞球体的糖异生的胰岛素介导的抑制
ICELL肝细胞球体13890mb-W的糖异生的胰岛素介导的抑制的数据图

核苷酸和辅助因子检测

NAD / NADH-GLO™和NADP / NADPH-GLO™试验

裂解分析

监视器NAD + / NADH或NADP / NADPH比与该裂解生物发光测定法。裂解物被分割,并通过酸/碱反应的措施或者氧化或还原NAD +或NADH的形式。轻微修改标准单层协议(在下面海报链路的细节)。

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NAD +和NADH水平在培养HCT116测量球体
NAD +和NADH水平在培养HCT116测量球体

在增加直径的培养HCT116球体NAD +和NADH水平的测量。用于与的CellTiter-Glo®底3D活细胞测量(信号相关因素与直径)平行孔。详细信息科学海报(下面的链接)。

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代谢物检测

乳酸-GLO™分析

非裂解分析选项

使用非裂解,敏感生物发光检测选项在三维培养监视器乳酸变化。试验要求每个时间点只有2-5μl培养基允许多个样本来自同一井。细胞可用于其它的基于细胞的测定或核酸分离。

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氧化应激

GSH / GSSG-GLO™分析

裂解分析

在GSH / GSSG比率监视器变化敏感的生物发光测定法。平行孔被加工为总GSH + GSSG和GSSG只和结果产生GSH / GSSG比率。从单层次要协议改变(5分钟摇)到三维培养(30分钟晃动)。CellTox™绿色可用于上行监测细胞毒性。

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监测总谷胱甘肽与活力在HCT 116球体的平行孔
监测总谷胱甘肽与活力在HCT 116球体的平行孔

在使用GSH/GSSG-Glo™试验或celliot - glo®3D试验测定总谷胱甘肽之前,先用丁硫氨酸磺福昔明处理球体48小时。详细信息科学海报(下面的链接)。

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代谢物检测

Glutamate-Glo™试验

非裂解分析选项

使用非溶菌的、敏感的生物发光检测方法监测3D培养基中谷氨酸的变化。测定需要在每个时间点用2-5毫升培养基,允许同一孔中有多个样品。细胞可用于其它的基于细胞的测定或核酸分离。

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代谢物检测

谷氨酸/谷氨酰胺-GLO™分析

非裂解分析选项

使用非裂解,生物发光敏感测定选项在3D培养监视器谷氨酰胺和谷氨酸的变化。谷氨酰胺测量基于谷氨酰胺转化为谷氨酸。试验要求每个时间点只有2-5μl培养基允许多个样本来自同一井。细胞可用于其它的基于细胞的测定或核酸提取。

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氧化应激

ROS-Glo™H2Ø2化验

非裂解分析选项

通过生物发光h监测活性氧2Ø2检测。Proluciferin基板用H直接反应2Ø2和测定组分活化prosubstrate转换为荧光素为生物发光检测。相同的方案用于单层和3D培养。细胞可用于其它的基于细胞的测定或核酸提取。

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HepG2球状体对ros诱导甲萘二酮的反应
肝癌球体甲萘醌的反应

不同直径不同程度的甲萘醌的HepG2细胞球体的响应。细胞在超低附着板(Corning)一起温育4天。H2Ø2与ROS-GLO™ħ测量水平2Ø2测定并在GloMax®发现仪器读取。在应用笔记详细信息(下面的链接)。

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表达的变化

相比单层培养时在3D培养中生长的细胞可具有在基因表达的差异。在细胞 - 细胞接触和细胞 - 基质接触的变化将是非常不同的,并且氧和营养物质的培养物内的梯度也将影响基因表达。为了分析基因表达的差异,RNA必须进行分离和定量。然后,特定基因通过RT-qPCR分析或细胞变化是通过样RNA-SEQ技术来监测。

特色产品

ReliaPrep™RNA小量提取系统

从3D培养分离物应用就绪的总RNA或miRNA监测表达的变化。所述ReliaPrep™RNA Miniprep试剂系统协同使用类似实时-GLO™MT细胞活力检测非裂解细胞试验。

从HEK293微组织球状体RNA提取
从HEK293微组织球状体RNA提取
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基因组分析

了解基因型-表现型或表型-基因型差异是重要的,特别是在研究原发细胞或肿瘤时。你可以分析一个基因型,使用3D细胞培养来了解表型,或者你可以选择研究表型,然后看看基因型,以了解这些变化发生的原因。对于基因组DNA分析,你需要提取和量化DNA。然后你会通过qPCR来观察特定的基因,或者选择用NGS来检查基因组。如果你使用的是原代细胞,你必须能够区分哪些样本来自于通常用于这项任务的供体- str特征。STR剖面对于确认你正在处理的细胞是否真的是你想要的细胞也很重要。

特色产品

Maxwell®RSC培养细胞DNA试剂盒

从3D培养以简单的基因组分析分离应用就绪基因组DNA,步入式远使用Maxwell®RSC仪器自动化协议。纯化DNA准备在大约45分钟的分析。分离的gDNA可用于对基因拷贝数和生物标志物,用于抽样跟踪或验证,并且基于测序的分析基于STR-分析基于定量PCR-分析。

使用Maxwell®RSC培养细胞DNA试剂盒从不同起始量的HCT116细胞中分离的DNA浓度
使用Maxwell®RSC培养细胞DNA试剂盒从不同起始量的HCT116细胞中分离的DNA浓度
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