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CRISPR DIY概述

如果您计划使用Hibit标记设计支持自己的CRISPL的工作流程以研究内源性蛋白,您不必单独使用它。利用我们深入的经验来确保您获得所需的结果。

CRISPR DIY过程总结

在创建敲门式细胞系之前,您需要执行一些基因组分析以确定Cas9切割部位的理想位置,并设计将重新组合的供体DNA插入所需的基因组位置。以下是您将关注的基本步骤以及对该过程的更详细的指导。

  1. 设计和订购您的指南RNA,供体DNA和Cas9。
  2. 获得权利合成Hibit标签。
  3. 与oligo供应商合作以获得所需的材料。
  4. 执行基因编辑步骤以将Hibit标签添加到感兴趣的目标。
  5. 测定细胞库或向前移动克隆分离。
下载详细协议
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最新研究

Promega的科学家继续研究使用CRISPR-Cas9内源性标记HiBiT蛋白。请阅读我们最近的研究项目,该项目展示了HiBiT敲入标记是如何广泛适用和可扩展的方法来分析内源性蛋白质,并展示了内源性标记相对于过表达模型的优势。

读博客
hibit-knockins

具有多种结构和功能的内源性蛋白质的蛋白质标记。利用CRISPR/Cas9基因编辑对代表各种细胞功能的内源性基因位点进行HiBiT标记,如所示。采用生物荧光成像验证表达的hibit标记蛋白通过显示预期的亚细胞定位准确地反映了自然生物学。

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表达用于HIBIT分析的细胞内LGBit蛋白质允许您测量内源性调节的HIBIT标记的蛋白的实时丰度,以及用额外的HIBIT作为纳米ret TM应用中的能量供体,以进行更多的测定可能性。bob娱乐平台下载

  • 进行活细胞,对Hibit标记蛋白的动力学分析;不需要细胞裂解
  • 与外源性或内源性表达的HiBiT融合蛋白兼容
  • 使用补充HiBiT作为活细胞NanoBRET™应用的能量供体bob娱乐平台下载

有几种工具可用于将细胞内LGBET纳入您的CRISPR / CAS9 HIBIT敲入工作流程。

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15315MB-W.

固化物处理后内源性HIBIT-BRD4的降解动力学。HIBIT插入HEK293 LGBit细胞系中的内源BRD4基因座。用含有纳米Glo®EndurazineTM衬底的CO 2独立培养基中的MZ1滴定处理细胞。

您对设计您的CRISPR敲门实验有疑问吗?

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