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CRISPR DIY概述

如果你打算设计自己的CRISPR-enabled工作流程,使用HiBiT标签来研究内源性蛋白质,你不必独自去做。利用我们深入的经验,确保您得到您需要的结果。

CRISPR DIY过程总结

在创建敲入细胞系之前,您需要进行一些基因组分析,以确定Cas9切割位点的理想位置,并设计供体DNA,以重组将HiBiT标签插入所需的基因组位置。以下是您将遵循的基本步骤,以及有关流程的更详细指导。

  1. 设计并订购你的引导RNA、供体DNA和Cas9。
  2. 获得权利合成HiBiT标签。
  3. 与oligo供应商合作以获得所需的材料。
  4. 执行基因编辑步骤,将HiBiT标签添加到感兴趣的目标。
  5. 检测细胞池或进行克隆分离。

下载详细协议
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最新的研究

Promega科学家继续研究CRISPR-Cas9在HiBiT内源性标记蛋白质中的应用。阅读我们最近的研究项目,该项目展示了HiBiT敲入标签是如何广泛适用和可扩展的方法来分析内源性蛋白质,并展示了内源性标签与过表达模型相比的优势。

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不同结构和功能蛋白的内源性HiBiT标记。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对代表各种细胞功能的内源性基因位点进行HiBiT标记,如图所示。通过生物荧光成像,验证表达的hibit标记蛋白通过显示预期的亚细胞定位准确地反映自然生物学。

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表达用于HiBiT分析的细胞内LgBiT蛋白允许您测量内源性调节的HiBiT标记蛋白质的实时丰度,以及使用补充的HiBiT作为NanoBRET中的能量供体™ 更多分析可能性的应用。bob娱乐平台下载

  • 对HiBiT标记的蛋白质进行活细胞动力学分析;不需要细胞裂解
  • 与外源性或内源性表达的HiBiT融合蛋白兼容
  • 使用补充HiBiT作为活细胞NanoBRET™应用的能量供体bob娱乐平台下载

有几种工具可用于将细胞内LgBiT纳入CRISPR/Cas9 HiBiT敲入工作流。

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PROTAC处理后内源性HiBiT-BRD4的降解动力学。HiBiT插入HEK293 LgBiT细胞系的内源性BRD4位点。在含有纳米Glo®Endurazine的CO2非依赖性培养基中用MZ1滴定法处理细胞™ 基底

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