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CRISPR DIY概述

如果你计划设计自己的CRISPR工作流来研究使用HiBiT标记的内源性蛋白质,你不必单干。利用我们的深入经验,确保您获得所需的结果。

CRISPR DIY工艺概述

在建立敲入细胞系之前,你需要进行一些基因组分析,以确定Cas9切割位点的理想位置,并设计供体DNA进行重组,将HiBiT标签插入所需的基因组位置。以下是您将遵循的基本步骤,以及有关该过程的更详细指导。

  1. 设计并订购你的指导RNA,供体DNA和Cas9。
  2. 获得权利合成HiBiT标签。
  3. 与寡头供应商合作获得所需材料。
  4. 执行基因编辑步骤,将HiBiT标签添加到感兴趣的目标。
  5. 分析细胞池或进行克隆分离。
下载详细协议
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最新研究

Promega的科学家继续研究CRISPR-Cas9在用HiBiT对蛋白质进行内源性标记方面的应用。阅读我们最近的研究项目,该项目展示了HiBiT敲入标记是一种广泛适用和可扩展的方法来分析内源性蛋白质,并展示了内源性标记相对于过表达模型的优势。

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具有不同结构和功能的蛋白质的内源性HiBiT标记。CRISPR/Cas9基因编辑用于HiBiT标记代表各种细胞功能的基因的内源性位点,如图所示。进行生物发光成像以验证表达的HiBiT标记蛋白通过显示预期的亚细胞定位来准确反映自然生物学。

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表达细胞内LgBiT蛋白进行HiBiT分析,可以实时测量内源性调控的HiBiT标记蛋白的丰度,以及使用补充的HiBiT作为NanoBRET中的能量供体™ 更多分析可能性的应用。bob娱乐平台下载

  • 对HiBiT标记的蛋白质进行活细胞动力学分析;无需细胞裂解
  • 与外源或内源表达的HiBiT融合蛋白相容
  • 利用HiBiT作为活细胞纳米粒的能量供体™ 应用bob娱乐平台下载

有几种工具可用于将细胞内LgBiT合并到CRISPR/Cas9 HiBiT敲入工作流中。

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PROTAC处理后内源性HiBiT-BRD4的降解动力学。HiBiT插入HEK293-LgBiT细胞系内源性BRD4位点。在含有纳米Glo®Endurazine的CO2非依赖性培养基中用MZ1滴定法处理细胞™ 基底。

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