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病毒研究

我们提供合作支持和广泛的试剂组合,用于研究冠状病毒和其他新兴病毒疾病的研究实验室。我们支持科学家开发疫苗并回答有关病毒病理学和治疗的问题,包括:

  • 病毒是如何进入人体细胞的?
  • 病毒是如何让人生病的?
  • 什么治疗可以用来缓解症状?
  • 如何获得对病毒的免疫力?

跟踪和监测细胞中的病毒活性

了解病毒病原体和宿主细胞之间的相互作用,以及监测病毒活性对细胞的影响,对于开发有效的抗病毒治疗或疫苗至关重要。Promega技术用于监测病毒发病机制的关键步骤,包括检测病毒与宿主细胞表面受体的相互作用,跟踪和监测病毒核酸和蛋白在细胞内的生产,监测宿主细胞活力和代谢。

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检测病毒:宿主蛋白:蛋白质相互作用

了解病毒如何进入宿主细胞可能是开发治疗或预防感染的第一步。病毒进入依赖于蛋白质:宿主细胞表面受体和病毒蛋白质之间的蛋白质相互作用。蛋白质:蛋白质相互作用分析是研究这些相互作用的有价值的工具。

NanoBiT®和NanoBRET™技术提供了检测蛋白所需的灵敏度:蛋白相互作用在体内表达的浓度。这两种方法都是基于生物荧光的方法,由于所用荧光素酶的体积小且信号明亮,因此在病毒研究中特别有用。有关更多细节,请参阅下面的参考资料和资源。bob官方 到yb4 uk网站

纳米LUC技术在病毒学中的应用

Reporter技术正在创造比以往任何时候都更详细地研究病毒:宿主相互作用的方法。

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参考文献

病毒研究中的蛋白质相互作用
SARS-CoV-2蛋白相互作用
NanoLuc®技术

迪克逊,其子as。. (2016)NanoLuc互补报告器优化用于精确测量细胞中的蛋白质相互作用ACS化学公司。比尔。11400 - 8。

Machleidt、T。(2015)NanoBRET–一种用于分析蛋白质相互作用的新型BRET平台ACS化学公司。比尔。10,1797-804。

跟踪重组病毒和检测报告程序活动

荧光素酶报告提供了一种简单方便的方法,用于监测潜在治疗的效果,创建检测病毒抗体的体外分析,以及在动物模型中对病毒进行成像。小尺寸的NanoLuc®荧光素酶对于创建报告病毒特别有用。

其他记者,包括firefly和雷尼利亚荧光素酶,通常用于制造假型病毒。伪型病毒颗粒是通过用另一种病毒的宿主结合蛋白替换宿主结合蛋白,并添加一个基因报告器来制造的,这使研究人员能够研究病毒进入过程。伪型病毒也被用来研究病毒的抑制剂,如抗体和小分子化合物。

体内追踪SARS-CoV-2的进展

NanoLuc荧光素酶成像是如何被用于研究病毒感染和评估治疗的。

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参考文献

利用报告分析法进行假病毒研究

小米,j.k.。(2019)在生物安全2级环境中生产用于研究高致病性冠状病毒的假型颗粒J.维斯。费用. (145.),E59010。

利用假病毒研究受体结合

墙壁,A.c。,. (2020)SARS-CoV-2刺突糖蛋白的结构、功能和抗原性单间牢房2020年3月9日在线。

审查

安徒生,P.I.(2020年)发现和开发安全型广谱抗病毒药物国际期刊信息系统。93.,268-75。

小而明亮的荧光素酶报告基因的优点

重组报告病毒是进一步了解病毒在细胞和动物模型中的生命周期和致死率的重要工具。报告病毒使跟踪同一动物感染的时间和量化事件,如细胞进入和复制变得更容易。

将大报告基因(如萤火虫荧光素酶)插入基因组通常会导致病毒过程中的缺陷。由于尺寸小,NanoLuc®和HiBiT标签可以稳定地插入病毒基因组,而不会破坏病毒的自然生物学。

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检测和监控病毒拷贝数

基于PCR的方法,如终点和实时PCR和RT-PCR,是用于病毒检测试验开发和病毒基因组分析的基本工具。

GoTaq®PCR和qPCR系统和GoScript™逆转录酶提供强大和可复制的扩增和反转录,用于检测和扩增大量病毒靶点的序列。

GoTaq®1-Step RT-qPCR系统获批用于CDC协议用于SARS-COV-2检测。PCR主混合物也已用于开发SARS-CoV-2 PCR诊断检测。

CDC SARS-CoV-2检测方案

GoTaq®1步探针系统是科罗娜啤酒实时RT-PCR诊断面板使用的一种选择。
视图协议

参考文献

GoTaq®一步RT qPCR系统

纳尔逊,A.C。. (2020)使用384孔格式和三种提取方法的Covid-19 QRT-PCR检测测定的分析验证.doi:https://doi.org/10.1101/2020.04.02.022186

德鲁伊奇js。. (2018)最高的:一种产生重组RNA病毒克隆群体的快速反向遗传学方法紧急microb..感染。7.,40

qPCR检测病毒RNA

Cai, M。. (2020)病毒蛋白PB2的R251K替换增加了欧亚禽流感样H1N1猪流感病毒的复制和致病性病毒12(1), 52.

Si,L。,(2020)在病毒大流行中,将已批准的药物作为潜在的流感和covid - 19治疗药物重新利用的工具.Biorxiv,4月2020年4月。Doi:https://doi.org/10.1101 / 2012.04.13.039917

病毒的结构和特性

维奇,O。. (2014)细胞培养中胰蛋白酶对猪流行性腹泻冠状病毒刺突融合蛋白的水解激活j .性研究。88(14), 7952 - 7961。

监控主机单元功能

监测化合物的抗病毒活性包括检测宿主细胞中的病毒诱导细胞病变效应(CPE)。CellTiter-Glo®等适用于高通量分析的可行性分析可用于一次性测试数百或数千种化合物,从而减少分析潜在治疗效果所需的时间。生存能力测定也用于支持研究病毒的作用机制。

除了细胞病变效应外,病毒感染诱导细胞代谢的变化。在许多传染病中,病毒重新编程宿主细胞代谢以支持病毒复制。可以使用监测营养吸收和诸如NADPH等共同因子的变化等的测定来理解这些病毒诱导的代谢变化。

通过质谱对蛋白质进行表征是用于监测病毒诱导的宿主细胞变化的另一种方法。分析细胞蛋白质的变化有助于研究人员了解病毒如何与细胞途径相互作用。

在SARS-CoV-2候选药物筛选中使用细胞活力分析

田纳西大学健康科学中心的Colleen Jonsson博士三多年来一直在研究高致病性人类病毒。她领导了几个跨机构的项目,使用高通量的屏幕来发现可以用作抗病毒药物的小分子。现在,她利用这一经验找到了一个A。抗SARS-CoV-2的抗病毒治疗。对于高通量筛选,Jonsson博士使用CellTiter Glo®细胞活性测定来确定小分子是否抑制病毒诱导的细胞死亡。阅读更多在这里

“细胞滴度Glo分析提供了一种非常强大、易于使用的试剂,用于高通量筛选小分子抗病毒活性,以对抗在细胞系中引起细胞病变效应的病毒,如SARS-CoV和SARS-CoV-2。”

科琳·琼森博士区域生物安全实验室主任,田纳西大学健康科学中心宿主病原体系统研究所所长。

冠状病毒如何进入细胞以及如何阻止它

读取关于病毒宿主相互作用,以及细胞活力测定如何支持这些研究。

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参考文献

用细胞活力试验评价SARS-CoV-2抑制剂
SARS-CoV-2代谢影响综述

伯恩斯坦,S。(2020)内分泌和代谢与冠状病毒感染的关系纳特。牧师。内分泌醇。https://www.nature.com/articles/s41574-020-0353-9

SARS-COV-2感染的蛋白质组学学

博伊科娃,D。(2020)SARS-COV-2受感染的宿主细胞蛋白质组学显示潜在的疗效目标. DOI:10.21203/rs.3.rs-17218/v1于2020年4月17日访问。

监测免疫应答

病毒研究人员提出的一个关键问题是,宿主的免疫系统如何对病毒感染作出反应,包括适应性免疫和先天免疫。先天免疫反应包括炎症小体的激活和细胞因子的释放。虽然这种细胞因子释放是治疗性的,但“细胞因子风暴”对患者可能是一种不良副作用,必须通过额外的治疗手段来控制,以阻止释放的细胞因子(如IL-6和IL-15)的疗效。

除了先天免疫反应外,体液和细胞反应在宿主反应中也起着关键作用。这些问题可以通过报告生物测定以及检测caspase-1活性和细胞因子水平的细胞基础研究应用来回答。bob娱乐平台下载

细胞因子风暴

为什么宿主免疫应答使一些Covid-19例更严重。

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参考文献

病毒感染中的炎症小体激活

Soderholm, S。. (2016)磷酸蛋白质组学研究甲型流感病毒感染人巨噬细胞时的宿主反应(2016)分子与细胞蛋白质组学15(10),3203–3219.

SARS-CoV-2感染中的炎症体激活

康提P。(2020)冠状病毒-19(CoV-19或SARS-CoV-2)诱导促炎细胞因子(IL-1和IL-6)和肺部炎症:抗炎策略J比尔。雷格尔。顺势疗法。代理3月14日;34(2)doi: 10.23812/ con - e [Epub ahead of print]。

使用生物测定报告研究中和抗体

平托,D。. (2020)有效的Sarbecorvirus中和抗体的结构和功能分析. bioRxiv于2020年4月9日发布。

用于疫苗研发的RNA生产

转录RNA是疫苗生产、病毒标准和基础病毒研究所必需的。对于体内和体外研究,RiboMAX®RNA生产系统从DNA模板生成大量高质量RNA或mRNA,而不需要哺乳动物细胞或细胞成分。这些体外转录的病毒RNA或mRNA转录物,通常编码疾病特异性抗原,例如冠状病毒的棘突蛋白,可以用作病毒感染研究的接种材料。如果转录的mRNA将用作治疗药物,则编码所需蛋白质的mRNA可根据需要进行包装以递送至所需组织。

参考文献

冠状病毒RNA的生成

埃里克森K.K。,. (2008)以痘苗病毒为克隆载体构建重组冠状病毒及稳定的冠状病毒复制子RNA细胞系. 摘自:卡瓦纳D.(编辑)SARS-和其他冠状病毒。分子生物学方法(方法和方案),第454卷。Humana出版社,新泽西州托托瓦。

RNA制备

丁X。,(2020)一种新型的CYRPR-CAS12A(AIO-CRISPR)检测新型冠状病毒SARS COV-2和HIV病毒的快速、超敏和视觉检测BioRxiv查阅日期:2020年4月13日。doi.org/10.1101/2020.03.19.998724

用RiboMAX生产标准RNA

徐,L。. (2009)通过实时定量逆转录-PCR测定评估SARS-COV检测的敏感性和特异性中国病毒,24 (3),187 - 193。DOI 10.1007 / s12250 - 009 - 3021 - 8

生物荧光检测

在Promega病毒研究试剂中使用的生物发光技术使分析具有高灵敏度和简单易用。GloMax®平板阅读器带有预加载的协议,使读取和解读Promega发光分析的结果更加简单。