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SARS-CoV-2血清学和PCR检测

用于活性SARS-COV-2感染的准确分子试验和用于抗病毒抗体存在的随后的血清学试验是用于对抗Covid-19大流行的关键工具。基于PCR的测试用于鉴定受感染的个体,并且血清学检测是在恢复的那些人中了解免疫应答。两种类型的特异性和敏感性测试(用于诊断和抗体检测)是一种关键需求。

分子检测和血清学检测的研究、开发和制造是全世界许多实验室的重点。Promega为实验室设计、执行和扩大基于PCR的分子检测、进行血清学检测和研究新的血清学检测方法提供产品和定制服务。

用于PCR和血清学分析的SARS-CoV-2靶点

SARS-CoV-2是一种阳性的单链RNA病毒。基因组与SARS-CoV具有79.6%的同源性,并且SARS-CoV-2病毒与相同的ACE2细胞表面受体结合(1,2)。

SARS-COV-2基因组编码多种结构和非结构蛋白。结构蛋白质包括穗状花序,包膜(E),膜(M)和核衣壳(N)蛋白(1,3)。

病毒棘突蛋白的结构于2020年2月19日在《科学》杂志上发表(4)。棘突蛋白已被证明是与ACE2受体结合的位点,并且作为中和抗体的潜在靶点(5,6)和可防止粘附到靶细胞或ACE2受体内化的治疗靶点(7,8)具有重要意义。一些病毒蛋白也已成为抗病毒药物和其他治疗药物的潜在靶点(9)。

SARS-CoV-2结构蛋白

SARS-CoV-2血清学检测方法的研制

基于PCR的方法只能告诉我们采样时患者是否存在病毒。他们没有提供任何关于过去感染或是否存在抗SARS-CoV-2抗体的信息。需要通过血清学检测来回答有关个体暴露的这些重要问题,进行人群筛查和监测,并最终了解对该疾病的适应性免疫反应。

目前旨在了解对SARS-COV-2的免疫应答的相当大的研究努力,包括鉴定引发保护反应和开发血清学试验以检测抗SARS-COV-2抗体的病毒抗原。

提供特异和敏感的血清学测试以证明存在针对该病毒的抗体,对于疫苗开发工作和了解个人是否安全避免再次感染至关重要。抗体测试需要能够特异性检测SARS-CoV-2抗体,而不会与其他冠状病毒发生交叉反应。

SARS-CoV-2与COVID-19患者的抗体应答

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Ashandersoncmo

“世界各地的许多公司和研究团队正在努力开发血清学检测,可以帮助我们打击Covid-19。要广泛部署的任何测试必须证明敏感性和特异性,并且必须能够确定抗体水平是否实际上对患者保护。“

- Promega首席医务官Ash Anderson

血清学试验类型

大量的新冠病毒血清学检测进入市场,每天都有新的论文发表,有助于增加有关SARS-CoV-2免疫反应的信息。对SARS-CoV的研究和对SARS-CoV-2的一些初步研究表明,核衣壳(N)和刺突(S)蛋白引起的抗体反应可能是保护性的,或可能是疫苗开发的候选(5-6,14-16)。许多进入市场的检测检测到N或S蛋白的抗体(17)。一些研究表明,针对刺突蛋白受体结合域(RBD)产生的抗体能够中和病毒(18-23)。有关SARS-CoV-2免疫的许多剩余问题正在进行研究,包括针对该病毒产生的IgG抗体是否具有长期保护作用。

目前可用的SARS-CoV-2血清学检测主要有常规ELISA和化学发光免疫分析(CMIA)以及护理点(POC)侧流检测™ Dx SARS-CoV-2免疫分析法是一种基于生物发光技术的新型检测方法,与ELISA法和侧向流动法相比,具有速度快、可扩展性好等优点。

基于Lumit™技术测试

Lumit™Dx SARS-CoV-2免疫分析使用SARS-CoV-2特异性蛋白(spike蛋白),标记两个亚基NanoBiT®技术(Lumit™Dx CoV-2-SmBiT和Lumit™Dx CoV-2-LgBiT)。当标记的蛋白质与含有SARS-CoV-2抗体的样品一起孵育时,蛋白质与抗体结合,使SmBiT和LgBiT亚基靠近,形成一个功能性荧光素酶。加入Lumit™Dx检测试剂后,产生明亮的发光信号,使用微孔板阅读器检测信号。

与常规的ELISA方法不同,Lumit™DX SARS-COV-2免疫测定不需要洗涤步骤,允许更快,更可靠的样品处理。测定在96孔板中进行,并在1小时或更短的时间内产生结果。

此产品目前只在某些国家有售。

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酶联免疫吸附试验

市场上有许多ELISA或化学发光免疫分析法,它们使用病毒抗原来捕获测试样本中的抗体,其中许多以SARS-CoV-2尖刺或核衣壳蛋白为靶点。elisa型检测提供了量化抗体反应的优势,但由于涉及更多的试剂添加和洗涤步骤,因此比即时侧流型检测需要更长的时间。

这里有一个解释ELISA检测方法的视频

横向流动测试

在横向流动试验中,将样品添加到含有用胶体金标记的病毒抗原的固体支撑条中,并在该条的特定部分添加抗人IgM和IgG。样品中存在的抗SARS-CoV-2抗体与病毒抗原结合,然后在其穿过该区域时被抗人抗体捕获试纸条。出现一条可见的胶体金线,表明试样中存在IgM或IgG抗体。

这里有一个解释横向流动试验的视频

基于pcr的SARS-CoV-2检测方法

基于RT-qPCR的方法设计用于扩增sars - cov -2特异性序列,是目前用于检测活动性感染的主要方法。可针对N、E、S和RdRp序列中的各种独特SARS-CoV-2序列进行检测(3,10)。使用两个或两个以上靶点的RT-qPCR检测可能具有更高的特异性。

世界卫生组织(世卫组织)已公布摘要信息对于包括美国推荐协议(11)的少数议定书。CDC建议使用CDC2019新型冠状病毒(2019 nCoV)实时RT-PCR诊断面板其中包括用于核衣壳(N)基因不同区域的引物和探针,以及用于检测对照/临床样本中RNase P (RP)基因的额外引物/探针集(12,13)。

其他组织已发布自己的套件。2020年2月25日,Promega是公认的Co-Diagnostics, Inc.,以支持制造新的物流智能™ 新冠病毒-19试验,已获得CE标志批准,并可在欧洲作为体外诊断。

“Promega自豪地支持疾病预防控制中心的快速反应工作,并使用经批准的扩增技术支持新冠病毒-19检测实验室。”
Heather Tomlinson,Promega临床诊断总监

CDC新冠病毒-19诊断面板协议的产品选项

GoTaq®探针1-Step RT-qPCR系统是在CDC 2019-新的Coronavirus实时RT-PCR诊断面板中推荐的主混音选项,可通过FDA的紧急使用授权(EUA)提供。

直接PCR样品的制备

XpressAmp™ 直接扩增试剂无需预先提取RNA或DNA即可进行直接PCR。这些试剂用于制备用于qPCR或RT-qPCR分析的病毒样本。

美国疾控中心2019- new Coronavirus (2019- nCoV) Real-Time RT-PCR Diagnostic Panel是用于检测呼吸道标本中SARS-CoV- 2独特序列的检测方案。

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Sanger测序用于SARS-CoV-2研究

桑格测序可以补充SARS-CoV-2研究和变异检测的其他技术。从规模较小的项目到NGS结果的确认,Sanger测序被认为是金标准和应用最广泛的DNA测序方法。

此应用笔记提供了一种用于使用SARS-COV-2基因组的区域进行排序的示例协议ProDye™终止序列系统采用毛细管电泳分析频谱紧凑型CE系统

视图应用程序注意

参考

  1. 周,P。.(2020)与可能起源于蝙蝠的新冠状病毒有关的肺炎暴发自然界579, 270 - 3所示。
  2. 朱,N。et al。(2020)一种新型冠状病毒来自2019年中国肺炎患者NEJM382:727-33。
  3. 李,X。et al。(2020)COVID-19的分子免疫发病机制与诊断j .制药。肛交。10,第2期,(4月)102-8。
  4. Wrapp D。et al。(2020)2019-nCoV峰在预融合构象中的Cryo-EM结构科学367, 1260 - 3所示。
  5. 墙壁,交流.(2020)SARS-CoV-2刺突糖蛋白的结构、功能和抗原性细胞181(2),281-292.e6。
  6. 王,C..(2020)阻断SARS-CoV-2感染的人单克隆抗体Nat Commun11, 2251年。
  7. 理查森,P。et al。(2020)Baricitinib作为2019年nCoV急性呼吸道疾病的潜在治疗药物兰蔻395,E30-E31(2020)。
  8. Hoffmann,M.et al。(2020)SARS-CoV-2细胞进入依赖于ACE2和TMPRSS2,并被临床证实的蛋白酶抑制剂阻断细胞181(2)271 - 280. e8。
  9. 吴,r.,.(2020)当前治疗COVID-19的药物最新情况。咕咕叫杂志。代表.5月11日;1 15。doi: 10.1007 / s40495 - 020 - 00216 - 7。
  10. 科曼,V.M.et al。(2020)通过实时RT-PCR检测2019年新型冠状病毒(2019-NCOV)欧元Surveill。25, 1560 - 7917. - 10.2807 / es.2020.25.3.2000045。
  11. 世界卫生组织聚合酶链反应规程-世界卫生组织. 于2020年5月13日访问。https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/whoinhouseassays.pdf?sfvrsn=de3a76aa_2.
  12. 美国疾控中心2019-新型冠状病毒(2019-nCoV)实时RT-PCR诊断小组. 查阅日期:2020年5月13日。https://www.fda.gov/media/134922/download.

  13. 2019冠状病毒病(COVID-19):实验室FAQ访问5月13日,2020年5月。https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/testing-laboratories.html。

  14. 田,C。et al。(2020)SARS冠状病毒特异性人单克隆抗体的2019年新型冠状病毒穗蛋白有效结合出现。microb。感染.,9, 382 - 85。
  15. 艾哈迈德,旧金山那里.(2020)基于SARS-COV免疫研究的Covid-19冠状病毒(SARS-COV-2)的潜在疫苗靶向初探。病毒12 (3),254。
  16. 泰,M.Z。,.(2020)COVID-19的三位一体:免疫、炎症和干预奈特免疫.https://doi.org/10.1038/s41577 - 020 - 0311 - 8。
  17. COVID-19血清学检测约翰·霍普金斯大学健康安全中心。
  18. Premkumar、L。et al。(2020)病毒棘突蛋白的受体结合域是SARS-CoV-2患者抗体的免疫优势和高度特异性靶点。Sci Immunol5, doi: 10.1126 / sciimmunol。abc8413(2020)。
  19. 朱,B。,et al。(2020)SARS-CoV-2感染引发的人中和抗体自然界,内政部:10.1038/s41586-020-2380-z(2020年)。
  20. 施,R。et al。(2020)一种人类中和抗体靶向SARS-CoV-2受体结合位点自然界, doi: 10.1038 / s41586 y - 020 - 2381 -(2020)。
  21. 罗杰斯,t·F。et al。(2020)在小动物模型中分离有效的SARS-CoV-2中和抗体及其对疾病的保护科学(纽约州纽约市),内政部:10.1126/science.abc7520(2020年)。
  22. Seydoux,E.,et al。(2020)SARS-COV-2感染个体分析揭示了具有有限体细胞突变的有效中和抗体的发展免疫力, doi: 10.1016 / j.immuni.2020.06.001(2020)。
  23. 布鲁沃,P.J.M。,et al。(2020)来自COVID-19患者的强效中和抗体定义了多个脆弱目标科学(纽约州纽约市),内政部:10.1126/science.abc5902(2020年)。