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SARS-COV-2研究,疫苗和治疗发展

除了需要快速发展测定来检测SARS-COV-2并识别暴露的人外,Covid-19危机导致了巨大的全球努力,用于开发针对SARS-COV-2有效的药物治疗和疫苗。还需要更全面地了解SARS-COV-2病毒的生物学。我们支持努力开发疫苗的科学家,并回答有关病毒病理和治疗的问题,包括:

  • 病毒是如何进入人体细胞的?
  • 病毒是如何让人生病的?
  • 什么治疗可以用来减轻症状?
  • 如何获得对病毒的免疫力?

我们提供合作支持和广泛的试剂组合,用于研究冠状病毒和其他新兴病毒疾病的研究实验室。

跟踪和监测细胞中病毒活性

了解病毒病原体和宿主细胞之间的相互作用,监测病毒活性对细胞的影响,对于开发有效的抗病毒治疗或疫苗至关重要。Promega技术用于监测病毒发病机制关键步骤的研究,包括检测病毒与宿主细胞表面受体的相互作用,跟踪和监测细胞内病毒核酸和蛋白质的产生,以及监测宿主细胞的活力和代谢。

sars-cov-2-图2

检测病毒:宿主蛋白:蛋白质相互作用

了解SARS-COV-2病毒如何进入宿主细胞是发展治疗或预防感染的潜在第一步。病毒进入依赖于蛋白质:宿主细胞表面受体与病毒蛋白之间的蛋白质相互作用。蛋白质:蛋白质相互作用测定是用于研究这些相互作用的有价值的工具。

Nanobit®和Nanobret™技术提供检测蛋白质:蛋白质相互作用所必需的敏感性在体内表达的浓度。由于使用的荧光素酶的小尺寸和亮信号,两者都是基于生物发光的方法,其在病毒研究中特别有用。有关更多详细信息,请参阅以下引用和资源。bob官方 到yb4 uk网站

纳米技术应用于病毒学

记者技术正在创造学习病毒的方法:寄主互动比以往任何时候都更详细。

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工具书类

病毒研究中的蛋白质相互作用
SARS-CoV-2蛋白相互作用
NanoLuc®技术

迪克森,A.,. (2016)Nanoluc互补记者优化了精确测量细胞中蛋白质相互作用.ACS化学。生物。11,400-8。

Machleidt,T。,等。(2015)NanoBRET——一种用于蛋白质相互作用分析的新型BRET平台.ACS化学。生物。10, 1797-804.

追踪重组病毒并检测报告活性

荧光素酶报告提供了一种简单方便的方法,用于监测潜在治疗的效果,建立检测病毒抗体的体外试验,以及在动物模型中对病毒进行成像。小尺寸的NanoLuc®荧光素酶对于创建报告病毒特别有用。

其他记者,包括萤火虫和雷尼利亚荧光素酶,通常用于制造假病毒。通过用另一种病毒的宿主结合蛋白替换宿主结合蛋白,并添加一个基因报告子,使研究人员能够研究病毒的进入过程,从而制造出假型病毒颗粒。假型病毒也被用来研究病毒的抑制剂,如抗体和小分子化合物。

Remdesivir作为SARS-CoV-2潜在治疗药物的研究进展

这个博客重点介绍了使用报告病毒来研究抗病毒药物Remdesivir的有效性。
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工具书类

使用报告分析的假纲病毒研究

小米,J.K.,等。(2019)在生物安全2级环境下研究高致病性冠状病毒的假型粒子的产生.J、 维斯。费用. (145),e59010。

使用伪病毒研究受体结合

墙壁,交流。,. (2020)SARS-CoV-2棘突糖蛋白的结构、功能及抗原性研究.细胞2020年3月9日上线。

评论

安徒生,P.I.(2020)人内安全广谱抗病毒药物的发现与开发.int。J.IF。解释。93, 268-75.

小,明亮的荧光素酶记者的优点

重组报告病毒是进一步了解细胞和动物模型中病毒生命周期和杀伤力的重要工具。报告病毒使我们更容易跟踪同一动物的感染情况,并对细胞进入和复制等事件进行量化。

将大报告基因(如萤火虫荧光素酶)插入基因组通常会导致病毒过程中的缺陷。由于其体积小,NanoLuc®和HiBiT标签可以稳定地插入病毒基因组,而不会破坏病毒的自然生物学。

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检测和监控病毒拷贝数

基于PCR的方法,如终点PCR、实时PCR和RT-PCR,是病毒检测试验和病毒基因组分析的基本工具。

GOTAQ®PCR和QPCR系统和GOScript™逆转录酶提供鲁棒和可重复的扩增和逆转录,用于检测和扩增众多病毒靶标的序列。

批准GOTAQ®1步RT-QPCR系统CDC协议用于SARS-CoV-2检测。PCR主混合物也已用于开发SARS-CoV-2pcr诊断试验。

CDC SARS-CoV-2测试方案

GoTaq®1步探针系统是一种与新型冠状病毒实时RT-PCR诊断面板一起使用的选择。
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工具书类

GOTAQ®1步RT-QPCR系统

纳尔逊,A.C。. (2020)使用384孔格式和三种提取方法对COVID-19 qRT-PCR检测分析的分析验证. 内政部:https://doi.org/10.1101/2020.04.02.022186

Driouich.,J.-S。,. (2018)至高无上的一种产生重组RNA病毒克隆群体的快速反向遗传学方法.紧急情况.微生物. 感染。7, 40

用于检测病毒RNA的QPCR

蔡,M。. (2020)病毒蛋白PB2中的R251K替代增加了欧亚禽H1N1猪流感病毒的复制和致病性.病毒12(1),52。

si,l。,等。(2020)利用芯片上的人体器官作为工具,重新利用已批准的药物作为病毒大流行中潜在的流感和COVID19疗法. BioRxiv,2020年4月。内政部:https://doi.org/10.1101/2020.04.13.039917

病毒结构与特性

威奇特,O。. (2014)细胞培养中胰蛋白酶对猪流行性腹泻冠状病毒融合蛋白的水解激活作用.J、 维罗尔。88(14), 7952–7961.

监测宿主细胞功能

监测抗病毒活性的化合物包括测试宿主细胞中病毒诱导的细胞病变效应(CPE)。适用于高通量分析(如CellTiter Glo®)的活性测定可用于一次测试数百或数千种化合物,从而减少分析潜在治疗效果所需的时间。生存能力分析也用于支持研究病毒的作用机制。

除了细胞病变的影响,病毒感染诱导细胞代谢的变化。在许多传染病中,病毒通过重组宿主细胞代谢来支持病毒复制。这些病毒引起的代谢变化可以通过检测营养素的吸收和辅助因子如NADPH等的变化来理解。

用质谱法鉴定蛋白质是另一种用来监测病毒诱导的宿主细胞变化的方法。分析细胞蛋白质的变化有助于研究人员了解病毒如何与细胞途径相互作用。

细胞活力测定在SARS-CoV-2候选药物筛选中的应用

田纳西大学健康科学中心的ColleenJonsson博士研究高致病性人类病毒已有30多年了。她领导了几个跨机构的项目,利用高通量的屏幕来发现可以用作抗病毒药物的小分子。现在,她正利用这一经验寻找一种抗SARS-CoV-2的抗病毒疗法。在高通量筛选中,Jonsson博士使用CellTiter Glo®细胞活性测定来确定小分子是否抑制病毒诱导的细胞死亡。阅读更多在这里.

“细胞滴度Glo分析提供了一种非常强大、易于使用的试剂,用于高通量筛选小分子,以对抗在细胞系中引起细胞病变的病毒,如SARS-CoV和SARS-CoV-2。”

Colleen Jonsson博士是,田纳西州立大学卫生科学中心的托管病理学系统区域生物土地实验室和研究所主任。

冠状病毒如何进入细胞以及如何阻止它

了解病毒与宿主的相互作用,以及细胞活力分析如何支持这些研究。

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工具书类

细胞活力测定法评价SARS-CoV-2抑制剂
SARS-COV-2代谢影响概述

Bornstein,S.等。(2020)内分泌和代谢与冠状病毒感染的关系.纳特。版次。内分泌素。https://www.nature.com/articles/s41574-020-0353-9

SARS-CoV-2感染的蛋白质组学研究

Bojkova,D。等。(2020)SARS-CoV-2感染宿主细胞蛋白质组学揭示潜在的治疗靶点.DOI:10.21203 / RS.3.RS-17218 / V1 4月17日,2020年4月17日。

监测免疫反应

病毒研究人员提出的一个关键问题是宿主的免疫系统如何对病毒感染做出反应,包括适应性免疫和先天性免疫。先天性免疫反应包括炎症小体的激活和细胞因子的释放。虽然这种细胞因子的释放是治疗性的,但“细胞因子风暴”对患者来说可能是一种不良副作用,必须通过设计用于阻断释放的细胞因子(如IL-6和IL-15)的疗效的额外疗法来治疗。

除了先天免疫反应外,体液和蜂窝响应在宿主反应中发挥关键作用。这些问题可以用记者生物测定和测定来回答,以检测Caspase-1的活性和基于细胞的研究应用中的细胞因子的活性。bob娱乐平台下载

细胞因子风暴

为什么宿主免疫反应使一些COVID-19病例更严重。

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工具书类

病毒感染炎症激活

Soderholm,S。. (2016)磷蛋白酶在流感病毒感染期间表征宿主反应的人巨噬细胞(2016)分子与细胞蛋白质组学15(10),3203-3219。

SARS-COV-2感染中的炎症体活化

继续。等。(2020)冠状病毒-19(CoV-19或SARS-CoV-2)诱导促炎细胞因子(IL-1和IL-6)和肺部炎症:抗炎策略.j。BIOL。法规。荣誉。代理商3月14日;34(2)doi:10.23812/CONTI-E[Epub-before-print]。

用报告生物测定法研究中和抗体

平托,D。,. (2020)一种有效的sarbecorvirus中和抗体的结构与功能分析. bioRxiv于2020年4月9日发布。

RNA生产在疫苗研发中的应用

转录RNA是疫苗生产、病毒标准和基础病毒研究所必需的。在体内和体外研究中,RiboMAX®RNA生产系统从DNA模板生成大量高质量的RNA或mRNA,而不需要哺乳动物细胞或细胞成分。这些体外转录的病毒RNA或mRNA转录物,通常编码疾病特异性抗原,例如冠状病毒的棘突蛋白,可以用作病毒感染研究的接种材料。如果转录的mRNA将被用作治疗药物,则编码所需蛋白质的mRNA可被包装为递送到所需组织所必需的。

工具书类

冠状病毒RNA的产生

埃里克森K.K。,. (2008)使用痘苗病毒的重组冠状病毒作为克隆载体和含有冠状病毒复制子RNA的稳定细胞系. 在:卡瓦纳D.(编辑)非典型肺炎和其他冠状病毒。分子生物学方法(方法和方案),第454卷。Humana出版社,新泽西州托托瓦。

RNA制备

丁X。,等。(2020)一种新型冠状病毒SARS-Cov-2和HIV的快速、超灵敏、直观的CRISPR-Cas12a(AIOD-CRISPR)检测方法.生物奇查阅日期:2020年4月13日。doi.org/10.1101/2020.03.19.998724

核糖核酸标准生产

徐,L.. (2009)实时定量逆转录PCR检测SARS-CoV的敏感性和特异性评价.Virologica Sinica.,24 (3)187-193。DOI 10.1007 / S12250-009-3021-8

生物发光检测

用于病毒研究的Promega试剂中使用的生物发光技术使分析具有高灵敏度和简单易用性。GloMax®平板阅读器带有预加载协议,使得读取和解释Promega发光分析结果更加简单。