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SARS-COV-2研究,疫苗和治疗进展

除了需要检测的快速发展,检测SARS-COV-2,并确定暴露个人,COVID-19的危机已导致大规模全球努力开发药物治疗和疫苗对SARS冠状病毒-2有效。还需要对SARS冠状病毒2型病毒的生物学的更全面的了解。我们支持科学家合作,开发疫苗和回答有关病毒的病理和治疗包括的问题:

  • 如何在病毒进入人体细胞?
  • 如何病毒使人生病?
  • 什么治疗可用于缓解症状?
  • 如何免疫力的病毒得到了什么?

我们提供协作支持,并且在研究实验室研究冠状病毒和其他新兴病毒病所用试剂广泛的产品组合。

跟踪和监测细胞病毒活性

了解病毒病原体和宿主细胞之间的相互作用,以及监测病毒活性对细胞的作用,是有效的抗病毒治疗或疫苗的发展至关重要。Promega公司技术在研究监测病毒致病的关键步骤,包括检测病毒的相互作用与宿主细胞表面受体,跟踪和监测细胞内生产的病毒核酸和蛋白质,和监测的宿主细胞生存力和代谢使用。

SARS冠状病毒-2-无花果-2-

检测病毒和宿主蛋白:蛋白质相互作用

了解SARS-CoV的-2病毒如何进入宿主细胞是一种潜在的第一步开发一种治疗或预​​防感染。病毒进入是依赖于蛋白质:宿主细胞表面受体和病毒蛋白质之间的蛋白质的相互作用。蛋白质:蛋白质相互作用分析是研究这些相互作用的宝贵工具。

NanoBiT®和NanoBRET™技术提供以检测蛋白质所必需的灵敏度:在体内表达的浓度的蛋白质的相互作用。两者都是基于生物发光方法,这些方法在病毒研究是特别有用的,由于所使用的荧光素酶的小尺寸和明亮的信号。有关详细信息,请参阅下面的参考资料和资源。bob官方 到yb4 uk网站

NanoLuc技术应用于病毒学

更详细地比以往宿主相互作用:记者技术正在创造的方法来研究病毒。

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参考

在病毒研究蛋白质相互作用

罗尔,D.J.,等。(2018)HIV-1和脱壳逆转录需要eEF1A结合逆转录酶拇指域的表面暴露的酸性残基姆比奥9,e00316-18。

宫川,K.,。(2017)肿瘤抑制APC经由与加格前体蛋白相互作用组件促进HIV-1自然通讯8,14259。

NanoBRET技术介绍

Machleidt,T.,等。(2015)NanoBRET-A新颖BRET平台蛋白质 - 蛋白质相互作用的分析ACS化学。生物学。10, 1797 - 804。

NanoBiT技术介绍

迪克森,A.S.,。(2016)NanoLuc互补报告分子在细胞中的蛋白质相互作用的精确测量优化ACS化学。生物学。11,400-8。

轨道重组病毒和检测报告基因活性

荧光素酶报告提供用于监测潜在的治疗效果的简单且方便的方法,在体外测定法,用于检测病毒抗体产生,并在动物模型成像病毒。NanoLuc®荧光素酶的小尺寸是创造的记者病毒特别有用。

其他记者,包括萤火虫,海肾荧光素酶,在创作的假病毒经常被使用。假病毒颗粒通过用另一种病毒的宿主结合蛋白更换的主机结合蛋白和添加遗传记者,让研究人员研究病毒进入工艺制成。假型病毒也可用于病毒的研究抑制剂,如抗体和小分子化合物。

Remdesivir作为SARS-COV-2的潜在治疗

此博客的亮点使用的记者病毒研究抗病毒药Remdesivir的有效性。
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参考

使用报告基因分析研究假

小米,J.K.,等。(2019)假型颗粒的制备研究高致病性冠状在生物安全级别2设置J.可见。EXP。(145), e59010。

用假的来研究受体结合

墙壁,交流。。(2020)结构,功能和抗原性SARS-COV-2刺突蛋白细胞2020年3月9日上线。

评论

安德森,P.I.(2020)人体内安全广谱抗病毒药物的发现和开发诠释。J.天道酬勤。派息。93, 268 - 75。

一个小的,明亮的荧光素酶报告的优点

重组报告病毒是进一步扩大我们的病毒的生命周期和杀伤力的理解,在细胞和动物模型的重要工具。记者病毒更容易感染跟随在相同的动物随着时间的推移和量化事件,如进入细胞和复制。

的大的报道基因(例如,萤火虫萤光素酶)到基因组中的插入经常导致病毒进程缺陷。由于其体积小,NanoLuc®和HiBiT标签可以稳定地插入到病毒基因组而不破坏病毒的自然生物学。

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检测和监测病毒拷贝数

基于PCR的方法,如端点和实时PCR和RT-PCR,在病毒检测测试开发中使用的基本工具,以及病毒基因组的分析。

GoTaq®PCR和qPCR系统和GoScript™逆转录酶提供强大的且可再现的扩增和反转录,用于检测和放大为众多病毒靶序列。

该GoTaq®一步法RT-qPCR的系统被批准用于与使用CDC协议SARS-CoV-2检测。PCR Master Mix也被用于a的开发SARS-CoV的-2 PCR诊断测试。

CDC SARS-COV-2测试协议

所述GoTaq®1步探头系统是用于与新颖的冠状实时RT-PCR诊断小组使用的选项。
查看协议

参考

GoTaq®1步RT-qPCR的系统

尼尔森,交流。(2020)使用384孔格式和三种提取方法对COVID-19 qRT-PCR检测方法进行分析验证。doi: https://doi.org/10.1101/2020.04.02.022186

Driouich,J.-S.,。(2018)最高:一个快速反向遗传学方法生成的重组RNA病毒克隆群体EMERG微型B。感染。7,40

定量PCR病毒RNA的检测

蔡,M.。(2020)该R251K置换在病毒蛋白PB2增加病毒复制和欧亚的致病性禽流感样H1N1猪流感病毒病毒12(1)52。

的Si,L。,等。(2020)人体器官级芯片作为工具来重新规划批准的药物,如病毒大流行的潜在流感和COVID19疗法。BioRxiv, 2020年4月。DOI: https://doi.org/10.1101/2020.04.13.039917

病毒结构与表征

Wicht,O.。(2014)将猪流行性腹泻冠状病毒融合蛋白的蛋白水解激活胰蛋白酶在细胞培养病毒学杂志。88 (14),7952-7961。

监控主机细胞功能

的抗病毒活性的化合物监测包括测试用于在宿主细胞中的病毒诱导的致细胞病变效应(CPE)。甲活力测定适合于高通量分析如的CellTiter-Glo®底为一次测试化合物的数百或数千,减少了分析的潜在治疗效果所需要的时间是有用的。活力测定也可用于研究病毒作用机制的研究支持。

除了细胞病理效应,病毒感染还引起细胞代谢的改变。在许多传染病中,病毒通过重新编程宿主细胞的新陈代谢来支持病毒的复制。这些病毒诱导的代谢变化可以通过监测营养摄取和辅助因子(如NADPH)变化的化验来了解。

通过质谱法的蛋白质的表征是用于监测在宿主细胞中病毒诱导的变化的另一种方法。在细胞蛋白的变化的分析帮助研究人员了解病毒与细胞路径相互作用。

冠状病毒是如何进入细胞,以及如何阻止它

了解病毒宿主的相互作用,以及细胞活力测定如何支持这些研究。

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参考

评价SARS-CoV的-2抑制剂使用细胞生存力测定
的SARS-COV-2代谢的影响概述

伯恩斯坦S.等。(2020)内分泌和代谢链接冠状病毒感染纳特。启内分泌。https://www.nature.com/articles/s41574-020-0353-9

SARS-CoV-2感染的蛋白质组学研究

Bojkova,D.等。(2020)SARS-CoV-2感染宿主细胞蛋白质组学揭示了潜在的治疗靶点。DOI:10.21203 / rs.3.rs-17218 2020 / V1访问时间4月17日。

监测免疫反应

一个关键的问题问的病毒研究人员是如何宿主的免疫系统响应病毒感染,包括自适应和先天免疫。先天免疫反应涉及inflammasomes和细胞因子释放的活化。虽然这种细胞因子释放是治疗性的,“细胞因子风暴”可以是在必须与被设计来阻止所释放的细胞因子如IL-6和IL-15的功效另外的治疗来管理患者的不良副作用。

除了先天免疫反应,体液免疫和细胞应答在宿主反应关键作用。这些问题可以通过生物测定记者以及实验来回答检测的caspase-1和基于细胞的研究应用细胞因子水平的活动。bob娱乐平台下载

细胞因子风暴

为什么宿主免疫反应使一些COVID-19病例更加严重。

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参考

在病毒感染的炎性激活

Soderholm,S.。(2016)磷酸化蛋白质组学宿主反应特征在人巨噬细胞的甲型流感病毒感染(2016)分子与细胞蛋白质组学15(10),3203-3219。

在SARS-COV-2感染的炎性激活

孔蒂P.等。(2020)冠状病毒-19 (CoV-19或SARS-CoV-2)诱导促炎细胞因子(IL-1和IL-6)和肺部炎症:抗炎策略。生物。Regul。Homeost。代理3月14日;34(2)DOI:10.23812 / CONTI-E [印刷前的电子。

使用生物测定记者,研究中和抗体

平托,D.,。(2020)一种有效的肉瘤病毒中和抗体的结构和功能分析。bioRxiv发布2020年4月9日。

RNA生产用于疫苗研发

转录RNA所需的疫苗生产,病毒标准和基本的病毒研究。对于体内和体外研究,RiboMAX®RNA生产系统,而不需要的哺乳动物细胞或细胞成分产生从DNA模板的高质量的RNA或mRNA量大。这些体外转录病毒RNA或mRNA转录物,典型地编码的疾病特异性抗原,如冠状病毒的刺突蛋白,可以用作病毒感染的研究接种材料。如果转录的mRNA将被用作治疗,编码期望的蛋白质mRNA的可包装成所需的用于递送至感兴趣的组织。

参考

冠状病毒RNA的产生

埃里克森株式会社,。(2008年)重组冠状的代使用痘苗病毒作为克隆载体和稳定细胞系含冠状病毒复制子RNA。在:卡瓦纳D.(EDS)和非典(SARS)冠状病毒的其他。分子生物学方法(方法和协议),第454 Humana公司出版社,托托瓦,NJ。

RNA制备

丁X.,等。(2020)所有-in-One的双CRISPR-Cas12a(AIOD-CRISPR)分析:案例的快速,超灵敏和新型冠状病毒SARS-COV-2和HIV病毒的视觉检测BioRxiv访问的4月13日到2020年doi.org/10.1101/2020.03.19.998724

标准RNA生产与RiboMAX

徐,L.。(2009年)实时定量逆转录- pcr检测SARS-CoV的敏感性和特异性评价中国病毒学24(3),187-193。DOI 10.1007 / s12250-009-3021-8

生物发光检测

在Promega公司试剂病毒研究中所使用的生物发光技术使检测灵敏度高,简单易用。GloMax®板阅读器配备了预加载的协议,使自Promega发光分析阅读和解释结果更简单。