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SARS-COV-2研究,疫苗和治疗发展

除了需要快速开发检测SARS-CoV-2和识别暴露个体的分析方法外,COVID-19危机还导致全球大规模努力开发有效对抗SARS-CoV-2的药物治疗和疫苗。还需要对SARS-CoV-2病毒的生物学进行更全面的了解。我们支持科学家开发疫苗并回答有关病毒病理学和治疗的问题,包括:

  • 病毒是如何进入人体细胞的?
  • 病毒如何让人生病?
  • 可用于缓解症状的哪种治疗方法?
  • 如何获得对病毒的免疫力?

我们提供合作支持和广泛的试剂组合,用于研究冠状病毒和其他新出现的病毒疾病的研究实验室。

跟踪和监测细胞中病毒活性

了解病毒病原体和宿主细胞之间的相互作用,并监测病毒活性对细胞的影响,对于开发有效的抗病毒治疗或疫苗至关重要。Promega技术用于监测病毒发病机理的关键步骤,包括检测病毒与宿主细胞表面受体的相互作用,跟踪和监测细胞内病毒核酸和蛋白质的产生,以及监测宿主细胞的活力和代谢。

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检测病毒:宿主蛋白:蛋白质相互作用

了解SARS-COV-2病毒如何进入宿主细胞是发展治疗或预防感染的潜在第一步。病毒进入依赖于蛋白质:宿主细胞表面受体与病毒蛋白之间的蛋白质相互作用。蛋白质:蛋白质相互作用测定是用于研究这些相互作用的有价值的工具。

Nanobit®和Nanobret™技术提供检测蛋白质:蛋白质相互作用所必需的敏感性在体内表达的浓度。由于使用的荧光素酶的小尺寸和亮信号,两者都是基于生物发光的方法,其在病毒研究中特别有用。有关更多详细信息,请参阅以下引用和资源。bob官方 到yb4 uk网站

纳米技术应用于病毒学

记者技术正在创造学习病毒的方法:寄主互动比以往任何时候都更详细。

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参考文献

病毒研究中的蛋白质相互作用

罗尔,D.J.,et al。(2018)HIV-1脱壳和逆转录需要eEF1A结合逆转录酶拇指域表面暴露的酸性残基MBIO.9, e00316-18。

Miyakawa,K.,.(2017)肿瘤抑制因子APC通过与Gag前体蛋白的相互作用促进HIV-1的组装自然环境814259。

SARS-CoV-2蛋白质相互作用

Azad,T.,et al。(2020)基于纳米琥珀酶的生物传感器揭示了SARS-COV-2穗作为病毒进入的N-连接糖基化的重要性.研究方块。DOI:10.21203 / RS.3.RS-58455 / V1

利马,米,.(2021)基于纳米荧光素酶的检测SARS-CoV-2尖刺受体结合域与ACE-2结合的研究进展物化学。Biophys。通讯》。534., 485 - 490。

张,H.,et al。(2020)蛋白酶体活化剂PA28γ依赖性降解冠状病毒疾病(Covid-19)核衣壳蛋白物化学。Biophys。通讯》529., 251 - 256。

Nanoluc®技术

迪克逊,其子as。.(2016)Nanoluc互补记者优化了精确测量细胞中蛋白质相互作用ACS化学。医学杂志。11.,400-8。

Machleidt、T。et al。(2015)纳米多元 - 一种用于分析蛋白质 - 蛋白质相互作用的新型BRET平台ACS化学。医学杂志。10.,1797-804。

轨道重组病毒并检测报告活动

荧光素酶报告基因提供了一种简单方便的方法来监测潜在治疗的效果,建立体外检测病毒抗体的方法,并在动物模型中成像病毒。NanoLuc®荧光素酶体积小,对于报告病毒的生成特别有用。

其他记者,包括萤火虫和萤火虫Renilla.荧光素酶通常用于伪型病毒的产生。假型病毒颗粒通过用另一种病毒的宿主结合蛋白代替宿主结合蛋白并添加遗传报告者,使研究人员研究病毒进入过程。假型病毒还用于研究病毒的抑制剂,例如抗体和小分子化合物。

瑞德西韦可能用于治疗SARS-CoV-2

该博客突出了报道病毒的使用来研究抗病毒药物雷达尔的有效性。
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参考文献

使用报告分析的假纲病毒研究

小米,J.K.,et al。(2019)伪型颗粒的生产在生物安全级别2设置中研究高度致病冠状病毒j .粘度实验.(145.),E59010。

使用伪病毒研究受体结合

墙壁,a.c。,.(2020)SARS-CoV-2刺突糖蛋白的结构、功能和抗原性细胞在线9月9日2020年3月9日。

审查

安德森,P.I.(2020)发现和开发携带宠物的广泛频繁抗病毒剂int。J.IM。解释。93.,268-75。

小,明亮的荧光素酶记者的优点

重组报告病毒是进一步理解细胞和动物模型中病毒生命周期和致命性的重要工具。报告病毒使人们更容易跟踪同一动物的感染情况,并量化诸如细胞进入和复制等事件。

将大型报告基因(例如,萤火虫荧光素酶)进入基因组通常会导致病毒过程中的缺陷。由于它们的尺寸小,可以稳定地插入病毒基因组中的Nanoluc®和Hibit标签,而不会破坏病毒的天然生物学。

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检测和监测病毒拷贝数

基于PCR的方法,例如终点和实时PCR和RT-PCR,是用于发展病毒检测试验的基本工具,以及用于分析病毒基因组。

GOTAQ®PCR和QPCR系统和GOScript™逆转录酶提供鲁棒和可重复的扩增和逆转录,用于检测和扩增众多病毒靶标的序列。

批准GOTAQ®1步RT-QPCR系统CDC协议对于SARS-COV-2检测。PCR主混合物也已用于开发SARS-CoV-2 PCR诊断试剂盒。

CDC SARS-CoV-2检测方案

GOTAQ®1步探针系统是一种用于新型冠状病毒实时RT-PCR诊断面板的选项。
查看协议

参考文献

GOTAQ®1步RT-QPCR系统

尼尔森,A.c。.(2020)使用384孔格式和三种提取方法的Covid-19 QRT-PCR检测测定的分析验证.doi: https://doi.org/10.1101/2020.04.02.022186

Driouich.js。.(2018)最高:一种快速反向遗传方法,可产生重组RNA病毒的克隆群体紧急情况活细胞.感染。7,40

用于检测病毒RNA的QPCR

Cai, M。.(2020)病毒蛋白PB2中R251K的替代增加了欧亚禽样H1N1猪流感病毒的复制和致病性病毒12(1),52。

si,l。,et al。(2020)人体器官芯片作为工具,将已批准的药物用作病毒大流行中潜在的流感和covid - 19治疗药物.Biorxiv,4月2020年4月。Doi:https://doi.org/10.1101 / 201917

病毒结构和表征

维奇,O。.(2014)胰蛋白酶在细胞培养中对猪流行性腹泻冠状病毒穗状融合蛋白的水解作用J.Virol。88(14)7952-7961。

监控主机单元功能

监测化合物的抗病毒活性包括在宿主细胞中检测病毒诱导的细胞病变效应(CPE)。如CellTiter-Glo®等适合于高通量分析的活性分析可用于一次性测试数百或数千种化合物,减少分析潜在治疗效果所需的时间。活力分析也用于支持研究病毒的作用机制。

除了细胞病变,病毒感染诱导细胞代谢的变化。在许多传染病中,病毒重新编程宿主细胞代谢以支持病毒复制。这些病毒诱导的代谢变化可以使用监测营养吸收和诸如NADPH等共同因子的变化等的测定来理解。

通过质谱法表征蛋白质是用于监测病毒诱导的宿主细胞变化的另一种方法。对细胞蛋白的变化分析有助于研究人员了解病毒如何与细胞途径相互作用。

使用细胞活性分析筛选SARS-CoV-2候选药物

30多年来,田纳西大学健康科学中心的科琳·琼森博士一直在研究高致病性人类病毒。她领导了几个跨机构的项目,利用高通量筛选发现可以用作抗病毒药物的小分子。现在,她正在利用这段经历寻找一种对抗SARS-CoV-2的抗病毒疗法。在她的高通量筛选中,Jonsson博士使用了CellTiter-Glo®细胞活力试验来确定小分子是否抑制病毒诱导的细胞死亡。阅读更多在这里

“Celltiter-Glo测定为抗病毒活性的抗病毒活性的高通量筛选提供了非常坚固的,易用的试剂,例如SARS COV和SARS COV-2,导致细胞系中的细胞病变作用。”

科琳议员博士是,田纳西州立大学卫生科学中心的托管病理学系统区域生物土地实验室和研究所主任。

冠状病毒如何进入细胞,如何阻断

读取有关病毒宿主相互作用,以及细胞活力测定如何支持这些研究。

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参考文献

使用细胞活力测定评估SARS-COV-2抑制剂
SARS-COV-2代谢影响概述

Bornstein,S.et al。(2020)内分泌和代谢与冠状病毒感染有关NAT。eveocrinol。https://www.nature.com/articles/s41574-020-0353-9.

SARS-COV-2感染的蛋白质组学

Bojkova,D。et al。(2020)SARS-COV-2受感染的宿主细胞蛋白质组学揭示了潜在的治疗目标.DOI:10.21203 / RS.3.RS-17218 / V1 4月17日,2020年4月17日。

监测免疫应答

病毒研究人员提出的一个关键问题是,宿主的免疫系统如何应对病毒感染,包括适应性免疫和先天免疫。先天免疫反应涉及炎症小体的激活和细胞因子的释放。虽然这种细胞因子的释放具有治疗作用,但“细胞因子风暴”可能会对患者产生不良副作用,必须通过其他治疗手段来阻断释放的细胞因子(如IL-6和IL-15)的疗效。

除了先天免疫反应外,体液和蜂窝响应在宿主反应中发挥关键作用。这些问题可以用记者生物测定和测定来回答,以检测Caspase-1的活性和基于细胞的研究应用中的细胞因子的活性。bob娱乐平台下载

细胞因子风暴

为什么宿主免疫应答使一些Covid-19例更严重。

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参考文献

病毒感染炎症激活

Soderholm,S。.(2016)磷蛋白酶在流感病毒感染期间表征宿主反应的人巨噬细胞(2016)分子和细胞蛋白质组学15 (10),3203-3219。

SARS-COV-2感染中的炎症体活化

CONTI P.et al。(2020)促炎细胞因子(IL-1和IL-6)和Coronavirus-19的肺炎(CoV-19或SARS-COV-2):抗炎策略.j。医学杂志。法规。荣誉。代理商3月14日;34(2)doi: 10.23812/ cont - e[印刷前的Epub]。

利用报告生物测定法研究中和抗体

平托,D。.(2020)有效的Sarbecorvirus中和抗体的结构和功能分析.Biorxiv发布了4月9日20日。

RNA生产用于疫苗研发

疫苗生产,病毒标准和基本病毒研究需要转录的RNA。对于体内和体外研究,RiboMax®RNA生产系统从DNA模板产生大量的高质量RNA或mRNA,而不需要哺乳动物细胞或细胞组分。这些体外转录的病毒RNA或mRNA转录物通常编码诸如冠状病毒的尖峰蛋白质的疾病特异性抗原,可用作病毒感染研究的接种材料。如果将转录的mRNA用作治疗性,则可以根据需要包装编码所需蛋白质的mRNA,以便向感兴趣的组织递送。

参考文献

冠状病毒RNA的生成

eriksson k.k.,.(2008)使用痘苗病毒的重组冠状病毒作为克隆载体和含有冠状病毒复制子RNA的稳定细胞系.见:Cavanagh D.(编者)SARS和其他冠状病毒。分子生物学方法(方法和协议),第454卷。新泽西州托托瓦,Humana出版社。

RNA制备

丁X.,et al。(2020)一体化双重CRAP-CAS12A(AIOD-CRISPR)测定:一种新型冠状病毒SARS-COV-2和HIV病毒的快速,超细敏感和视觉检测的情况生物奇于2020年4月13日通过。doi.org/10.1101/2020.03.19.998724

标准RNA生产用核糖粉生产

徐,L..(2009)通过实时定量逆转录-PCR测定评估SARS-COV检测的敏感性和特异性Virologica Sinica.24(3)187-193。DOI 10.1007 / S12250-009-3021-8

生物荧光检测

用于病毒研究的Promega试剂中使用的生物发光技术使分析结果高灵敏度和简单易用。GloMax®平板阅读器配有预加载协议,使阅读和解释Promega发光检测结果更简单。