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克隆与DNA标记

修饰核酸的工具为许多分子生物学技术(如亚克隆)提供了基础。对于传统的DNA片段克隆,我们提供了多种限制性内切酶和T4 DNA连接酶。对于细菌转化,我们提供了多种感受态细胞,包括我们独特的单步KRX菌株。

对于其他克隆应用,我们提供T4 DNbob娱乐平台下载A激酶,小牛碱性磷酸酶和其他修饰酶。对于RNA转录,T7, SP6和T3 RNA聚合酶是可用的。

DNA/RNA标记的分类,包括台式和阶梯使实验成功的确认。

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克隆和DNA标记导论

亚克隆是分子生物学中的一个基本程序,用于将插入物从一个载体移动到另一个载体,以获得所需的功能,并表征感兴趣的DNA序列。

一种完成DNA插入物的转移的方法使用限制酶来消化片段和靶向量,其通常是质粒。通过将消化样品的预期尺寸与DNA标记片段进行比较来实现成功消化的确认。这是通过在琼脂糖凝胶上运行样品来完成的,以便通过尺寸分离DNA片段。然后使用T4 DNA连接酶将所需片段“粘贴”进入消化的质粒。

下一步是转换。用质粒转化细菌很重要,因为细菌被用作质粒存储和复制的手段。大肠杆菌如果细胞壁被改变,DNA更容易通过,细胞更容易吸收外来DNA。这种细胞被称为感受态细胞。对已成功转化的细胞的选择是通过对目标质粒的抗生素选择来完成的。

有很多方法可以确定转移是否成功,包括PCR、限制性内切酶酶切或测序。一旦确认,重组载体可以用于多种应用,如蛋白质表达或RNA转录。bob娱乐平台下载