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蛋白质表达

重组蛋白是由基因重组DNA编码的蛋白质,该基因重组DNA已在支持基因表达和信使RNA翻译的系统中克隆。通过重组DNA技术对该基因进行修饰,可以获得突变蛋白的表达。Promega公司提供的产品既可以在细胞内表达重组蛋白,也可以在细胞内表达重组蛋白大肠杆菌系统和各种无细胞系统,如兔网织红细胞裂解物(RRL)或小麦胚芽提取物(WGE)。

什么是蛋白质表达

最常用的无细胞表达系统来源于兔网织红细胞、小麦胚芽和小麦胚芽大肠杆菌. 有两种基于兔网织红细胞的无细胞表达系统:翻译系统和耦合翻译和转录(TNT®)系统。两者都提供翻译所需的大分子成分,如核糖体、tRNA、氨酰tRNA合成酶、起始、延伸和终止因子。利用翻译系统中的mRNA模板或耦合转录和翻译系统中的DNA模板(质粒DNA或PCR片段),可以在数小时内完成蛋白质合成。

t7rna聚合酶系统是最流行的方法生产蛋白质的细胞大肠杆菌. 在这个系统中,一个包含感兴趣的基因的表达载体,克隆在T7启动子的下游,被导入T7表达宿主。T7表达宿主如DE3菌株具有噬菌体t7rna聚合酶基因的染色体拷贝。当向培养物中加入诱导剂如IPTG或鼠李糖时,t7rna聚合酶被表达并转录相关基因,随后通过内源性蛋白质翻译机制翻译所需蛋白质。Promega公司提供现成的活性细胞,用于在细胞中表达重组蛋白大肠杆菌.