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蛋白表达

重组蛋白是一种在支持基因表达和信使RNA翻译的系统中克隆的基因-重组dna编码的蛋白质。通过重组DNA技术修饰基因可以导致突变蛋白的表达。Promega提供在细胞中表达重组蛋白的产品大肠杆菌系统和各种无细胞系统,如兔网织红细胞裂解物(RRL)或小麦胚芽提取物(WGE)。

什么是蛋白质表达

最常用的无细胞表达系统来源于兔网织红细胞、小麦胚芽和大肠杆菌.有两种类型的兔子网织细胞为基础的无细胞表达系统:翻译系统和耦合翻译和转录(TNT®)系统。两者都提供翻译所需的大分子成分,如核糖体、trna、氨基酰- trna合成酶、起始、延伸和终止因子。在翻译系统中使用mRNA模板或在偶联转录和翻译系统中使用DNA模板(质粒DNA或PCR片段),蛋白质合成可以在几个小时内完成。

T7RNA聚合酶系统是最流行的生产蛋白质的方法大肠杆菌.在该系统中,一个包含感兴趣的基因的表达载体,克隆在T7启动子的下游,被引入到T7表达宿主中。T7表达宿主如DE3菌株具有噬菌体T7 RNA聚合酶基因的染色体拷贝。当在培养物中加入诱导物如IPTG或鼠李糖时,T7 RNA聚合酶表达并转录感兴趣的基因,然后通过内源性蛋白翻译机制翻译所需的蛋白。Promega为重组蛋白的表达提供了现成的感受态细胞大肠杆菌