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蛋白质表达

重组蛋白是由基因重组DNA编码的蛋白质 - 已被克隆在支持基因表达和信使RNA的翻译的系统中。通过重组DNA技术改性基因可以导致突变蛋白的表达。Promega提供了基于细胞中重组蛋白的表达的产品大肠杆菌系统和各种无细胞系统,如兔子网织红细胞裂解液(RRL)或小麦胚芽提取物(WGE)。

什么是蛋白质表达

最常用的无用的细胞表达系统源自兔网,小麦胚芽和大肠杆菌。基于兔网的无细胞表达系统存在两种类型:翻译系统和耦合转录和转录(TNT®)系统。两者都提供翻译所需的大分子组分,例如核糖体,TrNA,氨基酰基-TRNA合成酶,引发,伸长和终止因子。蛋白质合成可以在偶联转录和翻译系统中使用平晶系统或DNA模板(质粒DNA或PCR片段)中的mRNA模板在几小时内进行。

T7 RNA聚合酶系统是合成蛋白质最常用的方法大肠杆菌。在该系统中,将含有感兴趣基因的表达载体克隆到T7启动子下游,被引入T7表达宿主中。T7表达宿主,例如DE3菌株具有噬菌体T7 RNA聚合酶基因的染色体拷贝。当向培养物中加入诸如IPTG或鼠李酮的诱导剂时,表达T7 RNA聚合酶并转录感兴趣的基因,然后通过内源蛋白翻译机械翻译所需的蛋白质。Promega提供即用型富集细胞,用于表达重组蛋白大肠杆菌