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蛋白表达

重组蛋白是由编码的蛋白质的基因,重组DNA已在一个系统中被克隆该信使RNA的基因和翻译的表达载体。通过重组DNA技术的基因的修饰可导致突变体蛋白质的表达。Promega公司提供的产品为两种重组蛋白质的表达在基于细胞的大肠杆菌系统和各种无细胞系统,例如兔网织红细胞裂解物(RRL)或小麦胚芽提取物(WGE)的。

什么是蛋白表达

最经常使用的无细胞表达系统从兔网织红细胞,麦胚和起源大肠杆菌。有两种类型的兔网织红细胞的基于无细胞表达系统的:翻译系统和耦合翻译和转录(TNT®)系统。两者都提供翻译所需的大分子组分,如核糖体,tRNA的,氨酰-tRNA合成,起始,延伸和终止因子。蛋白质合成可以使用mRNA的模板在耦合转录和翻译系统翻译系统或DNA模板(质粒DNA或PCR片段)几个小时来进行。

该T7 RNA聚合酶系统是生产蛋白中最流行的方法大肠杆菌。在该系统中,将含有感兴趣的基因,克隆在T7启动子下游的表达载体,被导入到T7表达宿主。T7表达宿主如DE3菌株具有噬菌体T7 RNA聚合酶基因的染色体拷贝。当一个这样的诱导物IPTG作为或鼠李糖加入到培养物中,T7 RNA聚合酶表达和转录感兴趣的基因,然后通过内源蛋白翻译机器所需的蛋白质的翻译。Promega公司提供现成的使用感受态细胞用于重组蛋白的表达大肠杆菌