蛋白质纯化

蛋白质纯化是用于分析单个蛋白质和蛋白质复合物的基本步骤。大肠杆菌仍然是许多研究人员的首选，该研究人员由于易于使用，快速细胞生长和培养成本低而产生重组蛋白。在大肠杆菌中表达的蛋白质可以以相对高的量纯化，但这些蛋白质，尤其是真核蛋白质，可能没有表现出适当的蛋白质活性或折叠。培养的哺乳动物细胞提供了具有适当翻译后修饰的适当折叠和功能性哺乳动物蛋白质的替代选择。

为了简化纯化，亲和纯化标签可以融合到感兴趣的重组蛋白上。常见的融合标签是添加到重组蛋白的N或c端上的多肽、小蛋白质或酶。纯化重组蛋白的第一步是制备细胞裂解液或上清液。对于分泌蛋白，需要最少的上清液准备，然后对纯化蛋白进行选择性结合、洗涤和洗脱。纯化后的蛋白质可以用蛋白酶裂解以去除亲和标签。