蛋白质纯化

蛋白质纯化是分析单个蛋白质和蛋白质复合物的基本步骤。大肠杆菌因其使用方便、细胞生长迅速、培养成本低等优点，一直是许多研究人员生产重组蛋白的首选。在大肠杆菌中表达的蛋白质可以得到相对高数量的纯化，但是这些蛋白质，特别是真核蛋白，可能不会表现出适当的蛋白质活性或折叠。培养的哺乳动物细胞提供了另一种选择，通过适当的翻译后修饰产生正确折叠和功能的哺乳动物蛋白质。

为了简化纯化，亲和纯化标签可以融合到感兴趣的重组蛋白。常见的融合标签是多肽，小蛋白质或添加到重组蛋白的N-或C-末端的酶。纯化重组蛋白的第一步是制备细胞裂解物或上清液。对于分泌的蛋白质，需要最小的上清液制剂，然后选择纯化蛋白的选择性结合，洗涤和洗脱。纯化后，蛋白质可以用蛋白酶切割以除去亲和标记。