蛋白质纯化

蛋白质纯化是分析单个蛋白质和蛋白质复合物的基本步骤。由于使用方便、细胞生长快、培养成本低，大肠杆菌仍是许多研究者生产重组蛋白的首选。在大肠杆菌中表达的蛋白质可以相对高的数量被纯化，但是这些蛋白质，特别是真核蛋白质，可能不会表现出适当的蛋白质活性或折叠。培养的哺乳动物细胞提供了一种选择，以生产适当折叠和功能的哺乳动物蛋白质，适当的翻译后修饰。

为了简化纯化，亲和纯化标签可以融合到感兴趣的重组蛋白。常见的融合标签添加至重组蛋白的N-或C-末端的多肽，小蛋白质或酶。在重组蛋白的纯化的第一步是细胞裂解物或上清液的制备。对于分泌的蛋白质，最小上清液制备是必需的，然后进行选择性结合纯化的蛋白质，洗涤和洗脱。纯化后，蛋白质可以用蛋白酶，以除去亲和标签被切割。