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测序:NGS和Sanger测序

在下一代测序工作流程中,核酸从样本中提取并片段化,排列成特定于平台的库结构,进行扩增和测序。无论使用何种样本类型或平台,整个工作流中的每一步都是取得成功的关键。

Promega支持NGS工作流程的产品包括ProNex®NGS定量和尺寸选择DNA纯化系统,用于测序前的文库制备,以及核酸提取和定量系统。Spectrum Compact毛细管电泳系统和ProDye™终止序列系统支持Sanger测序应用,如在转化培养中验证NGS碱基调用和确认基因组编辑。bob娱乐平台下载

NGS和Sanger测序介绍

从基础科学到转化研究,下一代测序(NGS,也被称为大规模平行测序)为基因组学、肿瘤学和生态学的研究开辟了新的途径。NGS技术的可用使测序成为诊断、法医和流行病学调查的常规和可行选择,并使许多基因组分析应用取得进展。bob娱乐平台下载

在Sanger测序(第一代测序)中,DNA片段的测序是通过加入链终止核苷酸,然后通过电泳和荧光信号检测分离。在NGS中,数以百万计的DNA片段被平行排列,核苷酸被添加到DNA链上时被检测到。DNA提取和片段后,每个DNA模板簇被PCR扩增,并附着在固体表面。然后对它们进行核苷酸询问,并在DNA测序时进行成像/测量。

目前有几种NGS技术可用:Illumina测序仪使用可逆终止子染料标记核苷酸来询问捕获的DNA。一旦每个碱基被读取,终止子和染料就会被切割和洗涤除去,形成一个正常的核苷酸。这条链再次是可扩展的,这个过程重复,沿着这条链继续测序。取代使用染料标记核苷酸,离子洪流测序仪测量氢离子释放在碱基合并,和454系统测量发光在核苷酸合并。这些测序仪可以并行处理大量样本,提高速度和吞吐量,并使整个基因组在短时间内的测序既可实现,又负担得起。