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测序方法:NGS和Sanger测序

在下一代测序流程中,从样本中提取核酸并片段化,排列成特定平台的文库构建,扩增并测序。无论示例类型或使用的平台是什么,整个工作流中的每一步都是获得成功的关键。

Promega公司的产品支持的NGS的工作流包括Pronex®NGS定量和大小选择性DNA纯化系统用于测序之前文库制备,以及核酸提取和定量系统。频谱紧凑型毛细管电泳系统支持Sanger测序应用中,如NGS碱基调用和在转化的培养物的基因组编辑的确认的验证。bob娱乐平台下载

简介NGS和桑格测序

从基础科学到转化研究,下一代测序(NGS,也被称为大规模平行测序)为基因组学、肿瘤学和生态学的研究开辟了新的途径。NGS技术的可用性使测序成为诊断、法医和流行病学调查的常规和可行选择,并使许多基因组分析应用取得进展。bob娱乐平台下载

在Sanger测序(第一代测序)中,DNA片段通过加入链末端核苷酸进行测序,然后通过电泳分离和荧光信号检测。在NGS中,数以百万计的DNA片段被平行排列,核苷酸被添加到DNA链中被检测出来。DNA提取和片段化后,用PCR扩增每个DNA模板簇,并附着在固体表面。然后,当DNA被测序时,它们会被核苷和成像/测量。

有几种可用的NGS技术:Illumina测序器使用可逆终止染料标记的核苷酸来询问捕获的DNA。一旦每个碱基被读取,终止子和染料被切割和洗涤除去,创造一个正常的核苷酸。该链再次可扩展,并重复这个过程,继续沿着该链排序。与使用染料标记的核苷酸不同,离子激流测序仪测量碱基掺入后氢离子的释放,454系统测量核苷酸掺入后的发光。这些测序仪可以并行处理大量样本,提高速度和吞吐量,并使整个基因组的测序在短时间内既可实现又负担得起。